动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2012年
12期
17-22
,共6页
郝明飞%张琳%胡北侠%崔言顺%张秀美
郝明飛%張琳%鬍北俠%崔言順%張秀美
학명비%장림%호북협%최언순%장수미
鸭坦布苏病毒%包膜蛋白%原核表达%间接酶联免疫吸附试验
鴨坦佈囌病毒%包膜蛋白%原覈錶達%間接酶聯免疫吸附試驗
압탄포소병독%포막단백%원핵표체%간접매련면역흡부시험
为建立特异性和敏感性高的检测鸭坦布苏病毒感染的方法,采用原核表达系统对鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因进行了克隆与表达,SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白大小为54.3 ku.Western blot结果表明,经亲和层析法纯化后的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应.以纯化的重组E蛋白作为包被抗原,初步建立了检测E蛋白抗体的间接ELISA方法.对ELISA各种反应条件进行了优化,确定了最适工作条件.优化后确定的抗原最适包被浓度为7 μg/mL,血清的最佳稀释度为1；320,酶标抗体最适稀释度为1:1 000.在优化条件下,阴性和阳性临界值判定标准为0.324 4.本研究建立的快速检测DT-MUV抗体的间接ELISA方法为该病的检测和流行病学调查提供了技术手段.
為建立特異性和敏感性高的檢測鴨坦佈囌病毒感染的方法,採用原覈錶達繫統對鴨坦佈囌病毒(DTMUV)E基因進行瞭剋隆與錶達,SDS-PAGE電泳結果顯示融閤蛋白大小為54.3 ku.Western blot結果錶明,經親和層析法純化後的重組蛋白能與DTMUV暘性血清髮生特異性反應.以純化的重組E蛋白作為包被抗原,初步建立瞭檢測E蛋白抗體的間接ELISA方法.對ELISA各種反應條件進行瞭優化,確定瞭最適工作條件.優化後確定的抗原最適包被濃度為7 μg/mL,血清的最佳稀釋度為1；320,酶標抗體最適稀釋度為1:1 000.在優化條件下,陰性和暘性臨界值判定標準為0.324 4.本研究建立的快速檢測DT-MUV抗體的間接ELISA方法為該病的檢測和流行病學調查提供瞭技術手段.
위건립특이성화민감성고적검측압탄포소병독감염적방법,채용원핵표체계통대압탄포소병독(DTMUV)E기인진행료극륭여표체,SDS-PAGE전영결과현시융합단백대소위54.3 ku.Western blot결과표명,경친화층석법순화후적중조단백능여DTMUV양성혈청발생특이성반응.이순화적중조E단백작위포피항원,초보건립료검측E단백항체적간접ELISA방법.대ELISA각충반응조건진행료우화,학정료최괄공작조건.우화후학정적항원최괄포피농도위7 μg/mL,혈청적최가희석도위1；320,매표항체최괄희석도위1:1 000.재우화조건하,음성화양성림계치판정표준위0.324 4.본연구건립적쾌속검측DT-MUV항체적간접ELISA방법위해병적검측화류행병학조사제공료기술수단.
