浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2013年
1期
34-41
,共8页
张雄飞%刘雅莉%娄倩%祁银燕%杜灵娟
張雄飛%劉雅莉%婁倩%祁銀燕%杜靈娟
장웅비%류아리%루천%기은연%두령연
启动子%增强子%重叠延伸PCR
啟動子%增彊子%重疊延伸PCR
계동자%증강자%중첩연신PCR
基于植物基因工程要求精确调控的目标,为转基因提供更多可供选择的启动子,使用重叠延伸PCR的方法设计并人工构建了2个增强型植物花特异双向启动子pPCHS-35S enhancer-pLCHS和pPCHS-OCS enhancerpLCHS.实验中,用本实验室保存的矮牵牛花特异启动子核心序列pPCHS、百合花特异启动子核心序列pLCHS、CaMV 35S增强子序列(35S enhancer)、OCS增强子序列(OCS enhancer)为模板,根据重叠延伸PCR原理,设计并合成了10条引物,进行两轮PCR,产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定,成功拼接出了与设计的双向启动子大小一致的2段序列.使用DAN回收试剂盒回收两段序列,克隆到pGEM-T Easy载体中并导入大肠埃希菌TOP10进行扩繁和保存,扩繁菌液进行测序分析,测序证实得到的两段序列与设计的双向启动子序列完全一致,成功获得2个增强型植物花特异双向启动子.本研究的结果能为今后利用多基因共转化的方法精确调控矮牵牛、百合等重要花卉的观赏性状提供有用的启动子.
基于植物基因工程要求精確調控的目標,為轉基因提供更多可供選擇的啟動子,使用重疊延伸PCR的方法設計併人工構建瞭2箇增彊型植物花特異雙嚮啟動子pPCHS-35S enhancer-pLCHS和pPCHS-OCS enhancerpLCHS.實驗中,用本實驗室保存的矮牽牛花特異啟動子覈心序列pPCHS、百閤花特異啟動子覈心序列pLCHS、CaMV 35S增彊子序列(35S enhancer)、OCS增彊子序列(OCS enhancer)為模闆,根據重疊延伸PCR原理,設計併閤成瞭10條引物,進行兩輪PCR,產物經瓊脂糖凝膠電泳鑒定,成功拼接齣瞭與設計的雙嚮啟動子大小一緻的2段序列.使用DAN迴收試劑盒迴收兩段序列,剋隆到pGEM-T Easy載體中併導入大腸埃希菌TOP10進行擴繁和保存,擴繁菌液進行測序分析,測序證實得到的兩段序列與設計的雙嚮啟動子序列完全一緻,成功穫得2箇增彊型植物花特異雙嚮啟動子.本研究的結果能為今後利用多基因共轉化的方法精確調控矮牽牛、百閤等重要花卉的觀賞性狀提供有用的啟動子.
기우식물기인공정요구정학조공적목표,위전기인제공경다가공선택적계동자,사용중첩연신PCR적방법설계병인공구건료2개증강형식물화특이쌍향계동자pPCHS-35S enhancer-pLCHS화pPCHS-OCS enhancerpLCHS.실험중,용본실험실보존적왜견우화특이계동자핵심서렬pPCHS、백합화특이계동자핵심서렬pLCHS、CaMV 35S증강자서렬(35S enhancer)、OCS증강자서렬(OCS enhancer)위모판,근거중첩연신PCR원리,설계병합성료10조인물,진행량륜PCR,산물경경지당응효전영감정,성공병접출료여설계적쌍향계동자대소일치적2단서렬.사용DAN회수시제합회수량단서렬,극륭도pGEM-T Easy재체중병도입대장애희균TOP10진행확번화보존,확번균액진행측서분석,측서증실득도적량단서렬여설계적쌍향계동자서렬완전일치,성공획득2개증강형식물화특이쌍향계동자.본연구적결과능위금후이용다기인공전화적방법정학조공왜견우、백합등중요화훼적관상성상제공유용적계동자.
