浙江工业大学学报
浙江工業大學學報
절강공업대학학보
Journal of Zhejiang University of Technology
2013年
4期
418-421
,共4页
可溶性表达%骨形态发生蛋白%融合表达%NusA
可溶性錶達%骨形態髮生蛋白%融閤錶達%NusA
가용성표체%골형태발생단백%융합표체%NusA
soluble-expression%bone morphogenetic protein%fusion expression%NusA
将N-利用基质(NusA)和人骨形态发生蛋白-2成熟肽(hBMP-2m)的编码基因进行基因融合,实现了hBMP-2m在大肠杆菌中的融合可溶表达.以大肠杆菌基因组DNA为模板PCR扩增得到NusA基因,通过NdeⅠ和AflⅡ酶切位点将其置换出重组融合表达载体pDsbA-hBMP-2m中的DsbA基因,使hBMP-2m基因重组于NusA基因的下游,重组质粒转化E.coli BL21 (DE3),获得工程菌.在30℃条件下,经IPTG诱导表达后,融合蛋白占细胞总蛋白的45％左右,并且主要以可溶形式存在,可溶部分达90％以上.经过简单的Ni2+柱一步纯化即可得到纯度较高的融合蛋白.通过融合表达的方式表达出可溶性的目的蛋白,有望复性后通过肠激酶酶切得到hBMP-2m单体,进一步二聚体化得到具有生物活性的hBMP-2m.
將N-利用基質(NusA)和人骨形態髮生蛋白-2成熟肽(hBMP-2m)的編碼基因進行基因融閤,實現瞭hBMP-2m在大腸桿菌中的融閤可溶錶達.以大腸桿菌基因組DNA為模闆PCR擴增得到NusA基因,通過NdeⅠ和AflⅡ酶切位點將其置換齣重組融閤錶達載體pDsbA-hBMP-2m中的DsbA基因,使hBMP-2m基因重組于NusA基因的下遊,重組質粒轉化E.coli BL21 (DE3),穫得工程菌.在30℃條件下,經IPTG誘導錶達後,融閤蛋白佔細胞總蛋白的45％左右,併且主要以可溶形式存在,可溶部分達90％以上.經過簡單的Ni2+柱一步純化即可得到純度較高的融閤蛋白.通過融閤錶達的方式錶達齣可溶性的目的蛋白,有望複性後通過腸激酶酶切得到hBMP-2m單體,進一步二聚體化得到具有生物活性的hBMP-2m.
장N-이용기질(NusA)화인골형태발생단백-2성숙태(hBMP-2m)적편마기인진행기인융합,실현료hBMP-2m재대장간균중적융합가용표체.이대장간균기인조DNA위모판PCR확증득도NusA기인,통과NdeⅠ화AflⅡ매절위점장기치환출중조융합표체재체pDsbA-hBMP-2m중적DsbA기인,사hBMP-2m기인중조우NusA기인적하유,중조질립전화E.coli BL21 (DE3),획득공정균.재30℃조건하,경IPTG유도표체후,융합단백점세포총단백적45％좌우,병차주요이가용형식존재,가용부분체90％이상.경과간단적Ni2+주일보순화즉가득도순도교고적융합단백.통과융합표체적방식표체출가용성적목적단백,유망복성후통과장격매매절득도hBMP-2m단체,진일보이취체화득도구유생물활성적hBMP-2m.
