中南医学科学杂志
中南醫學科學雜誌
중남의학과학잡지
JOURNAL OF UNIVERSITY OF SOUTH CHINA(MEDICAL EDITION)
2013年
2期
135-139
,共5页
任恋%唐超%刘宪楚%李容%戴悦%彭佩莹%莫小阳
任戀%唐超%劉憲楚%李容%戴悅%彭珮瑩%莫小暘
임련%당초%류헌초%리용%대열%팽패형%막소양
ISL1%斑马鱼%融合蛋白%多克隆抗体
ISL1%斑馬魚%融閤蛋白%多剋隆抗體
ISL1%반마어%융합단백%다극륭항체
目的 为了进一步研究1SL1作为第二生心区心脏前体细胞的分子标志在心脏发育中的功能,需要获得ISL1蛋白并制备其抗体. 方法 根据已报道的ISL1基因序列,以斑马鱼mRNA为模板进行PCR扩增得到ISL1部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a栽体上获得原核表达载体.将重组质粒进行酶切测序鉴定,然后利用大肠杆菌E.coli BL21对该重组质粒进行表达.经过IPTG诱导,采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的hisISL1融合蛋白免疫新西兰大白兔制备ISL1多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价. 结果 获得了ISL1原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗ISL1多克隆抗体. 结论 本实验为ISL1在斑马鱼心脏发育中的新功能的进一步研究奠定了基础.
目的 為瞭進一步研究1SL1作為第二生心區心髒前體細胞的分子標誌在心髒髮育中的功能,需要穫得ISL1蛋白併製備其抗體. 方法 根據已報道的ISL1基因序列,以斑馬魚mRNA為模闆進行PCR擴增得到ISL1部分編碼區序列,然後將其連接到pET-28a栽體上穫得原覈錶達載體.將重組質粒進行酶切測序鑒定,然後利用大腸桿菌E.coli BL21對該重組質粒進行錶達.經過IPTG誘導,採用Ni-IDA凝膠柱親和純化,將純化的hisISL1融閤蛋白免疫新西蘭大白兔製備ISL1多剋隆抗體,併用Western Blot檢測抗體效價. 結果 穫得瞭ISL1原覈錶達重組融閤蛋白及高效價的特異性兔抗ISL1多剋隆抗體. 結論 本實驗為ISL1在斑馬魚心髒髮育中的新功能的進一步研究奠定瞭基礎.
목적 위료진일보연구1SL1작위제이생심구심장전체세포적분자표지재심장발육중적공능,수요획득ISL1단백병제비기항체. 방법 근거이보도적ISL1기인서렬,이반마어mRNA위모판진행PCR확증득도ISL1부분편마구서렬,연후장기련접도pET-28a재체상획득원핵표체재체.장중조질립진행매절측서감정,연후이용대장간균E.coli BL21대해중조질립진행표체.경과IPTG유도,채용Ni-IDA응효주친화순화,장순화적hisISL1융합단백면역신서란대백토제비ISL1다극륭항체,병용Western Blot검측항체효개. 결과 획득료ISL1원핵표체중조융합단백급고효개적특이성토항ISL1다극륭항체. 결론 본실험위ISL1재반마어심장발육중적신공능적진일보연구전정료기출.
