解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2013年
2期
199-203
,共5页
冯海凉%王春景%顾蓓%杨振丽%刘玉琴
馮海涼%王春景%顧蓓%楊振麗%劉玉琴
풍해량%왕춘경%고배%양진려%류옥금
人脐静脉内皮%SV40%反转录-聚合酶链反应%免疫组织化学%透射电镜
人臍靜脈內皮%SV40%反轉錄-聚閤酶鏈反應%免疫組織化學%透射電鏡
인제정맥내피%SV40%반전록-취합매련반응%면역조직화학%투사전경
目的 建立猿猴病毒40(SV40)T抗原转化的人脐静脉内皮细胞(HVUEC)模型,为内皮研究提供可利用资源.方法 分离人脐静脉内皮细胞,原代培养.感染含有SV40大T、小T抗原的慢病毒,连续传代培养.对感染后的HUVEC,RT-PCR检测大T的表达,免疫细胞化学检测vWF、CD31、CD34的表达及结合凝集素能力,透射电镜观察内皮细胞的超微结构,Matrigel检测管状成型,进行染色体核型分析,皮下接种BABL/c-nu裸鼠检测致瘤性,PCR法进行种属鉴定及支原体检测,短串联重复序列(STR)检测鉴定细胞身份.结果 转化后的人脐静脉内皮细胞命名为PUMC-HUVEC-T1,扁平多角状,汇合时典型铺路石排列,体外传代40代以上(1:3～4)；细胞中有SV40LT mRNA的表达；vWF、CD31、CD34表达均阳性,可结合荆豆凝集素-1(UEA-1)；电镜可见WP小体；不同代数细胞核型正常稳定,裸鼠体内接种不成瘤.PUMC-HUVEC-T1种属鉴定为人源性,STR结果与原代HUVEC一致,无支原体的污染,国家实验细胞资源共享平台收藏.结论 建立了易获得、背景清楚、质量可靠的SV40 T抗原转化的HUVEC细胞系PUMC-HUVEC-T1.
目的 建立猿猴病毒40(SV40)T抗原轉化的人臍靜脈內皮細胞(HVUEC)模型,為內皮研究提供可利用資源.方法 分離人臍靜脈內皮細胞,原代培養.感染含有SV40大T、小T抗原的慢病毒,連續傳代培養.對感染後的HUVEC,RT-PCR檢測大T的錶達,免疫細胞化學檢測vWF、CD31、CD34的錶達及結閤凝集素能力,透射電鏡觀察內皮細胞的超微結構,Matrigel檢測管狀成型,進行染色體覈型分析,皮下接種BABL/c-nu裸鼠檢測緻瘤性,PCR法進行種屬鑒定及支原體檢測,短串聯重複序列(STR)檢測鑒定細胞身份.結果 轉化後的人臍靜脈內皮細胞命名為PUMC-HUVEC-T1,扁平多角狀,彙閤時典型鋪路石排列,體外傳代40代以上(1:3～4)；細胞中有SV40LT mRNA的錶達；vWF、CD31、CD34錶達均暘性,可結閤荊豆凝集素-1(UEA-1)；電鏡可見WP小體；不同代數細胞覈型正常穩定,裸鼠體內接種不成瘤.PUMC-HUVEC-T1種屬鑒定為人源性,STR結果與原代HUVEC一緻,無支原體的汙染,國傢實驗細胞資源共享平檯收藏.結論 建立瞭易穫得、揹景清楚、質量可靠的SV40 T抗原轉化的HUVEC細胞繫PUMC-HUVEC-T1.
목적 건립원후병독40(SV40)T항원전화적인제정맥내피세포(HVUEC)모형,위내피연구제공가이용자원.방법 분리인제정맥내피세포,원대배양.감염함유SV40대T、소T항원적만병독,련속전대배양.대감염후적HUVEC,RT-PCR검측대T적표체,면역세포화학검측vWF、CD31、CD34적표체급결합응집소능력,투사전경관찰내피세포적초미결구,Matrigel검측관상성형,진행염색체핵형분석,피하접충BABL/c-nu라서검측치류성,PCR법진행충속감정급지원체검측,단천련중복서렬(STR)검측감정세포신빈.결과 전화후적인제정맥내피세포명명위PUMC-HUVEC-T1,편평다각상,회합시전형포로석배렬,체외전대40대이상(1:3～4)；세포중유SV40LT mRNA적표체；vWF、CD31、CD34표체균양성,가결합형두응집소-1(UEA-1)；전경가견WP소체；불동대수세포핵형정상은정,라서체내접충불성류.PUMC-HUVEC-T1충속감정위인원성,STR결과여원대HUVEC일치,무지원체적오염,국가실험세포자원공향평태수장.결론 건립료역획득、배경청초、질량가고적SV40 T항원전화적HUVEC세포계PUMC-HUVEC-T1.
