解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2013年
2期
219-223
,共5页
吴艳芳%郭林霞%乐晓萍%丁一
吳豔芳%郭林霞%樂曉萍%丁一
오염방%곽림하%악효평%정일
Reg Ⅰ基因%胃泌素%转录因子%胃癌细胞%DNA-蛋白质印迹法
Reg Ⅰ基因%胃泌素%轉錄因子%胃癌細胞%DNA-蛋白質印跡法
Reg Ⅰ기인%위비소%전록인자%위암세포%DNA-단백질인적법
目的 探讨胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ(Reg Ⅰ)基因转录因子的效应.方法 应用巢式PCR技术从胃癌细胞SGC7901基因组DNA扩增Reg Ⅰ基因启动子1414bp片段,将该片段插入pMD19-T载体,序列分析鉴定.应用随机引物法以地高辛分别标记1414bp及其HindⅢ酶切800bp和614bp片段,经灵敏度检测后,作为探针.应用Genomatix MatInspector在线分析软件分析Reg Ⅰ基因启动子1414bp片段的转录因子结合位点.分别以10-7 mol/L和10-8mol/L胃泌素G-17处理胃癌细胞SGC7901 48h,提取核蛋白.应用DNA-蛋白质印迹法(Southern blotting),分别以地高辛标记的1414bp、800bp和614bp片段为探针检测胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ基因转录因子的效应.结果 1414bp探针可检测到20条蛋白主带.胃泌素孵育后,带型没有变化,但是一些条带的灰度值改变,带9、12、13、14、15和16的灰度值明显降低(P＜0.05)；不同浓度胃泌素处理组之间上述6个条带的灰度值差异不明显(P＞0.05).614bp探针可检测到灰度值变化的6条主带中的带9、12和13,胃泌素处理后,此3条主带的灰度值明显降低(P＜0.05).800bp探针可检测到灰度值变化的6条主带中的带9、12和14,胃泌素处理后,仅带14的灰度值明显降低(P＜0.05).614bp和800bp探针均未检出带15和带16.结论 胃癌细胞SGC7901Reg Ⅰ基因表达由多个转录因子协同调控.降低几个转录因子的结合活性可能是胃泌素上调胃癌细胞SGC7901Reg Ⅰ基因表达的途径之一.
目的 探討胃泌素對胃癌細胞SGC7901 Reg Ⅰ(Reg Ⅰ)基因轉錄因子的效應.方法 應用巢式PCR技術從胃癌細胞SGC7901基因組DNA擴增Reg Ⅰ基因啟動子1414bp片段,將該片段插入pMD19-T載體,序列分析鑒定.應用隨機引物法以地高辛分彆標記1414bp及其HindⅢ酶切800bp和614bp片段,經靈敏度檢測後,作為探針.應用Genomatix MatInspector在線分析軟件分析Reg Ⅰ基因啟動子1414bp片段的轉錄因子結閤位點.分彆以10-7 mol/L和10-8mol/L胃泌素G-17處理胃癌細胞SGC7901 48h,提取覈蛋白.應用DNA-蛋白質印跡法(Southern blotting),分彆以地高辛標記的1414bp、800bp和614bp片段為探針檢測胃泌素對胃癌細胞SGC7901 Reg Ⅰ基因轉錄因子的效應.結果 1414bp探針可檢測到20條蛋白主帶.胃泌素孵育後,帶型沒有變化,但是一些條帶的灰度值改變,帶9、12、13、14、15和16的灰度值明顯降低(P＜0.05)；不同濃度胃泌素處理組之間上述6箇條帶的灰度值差異不明顯(P＞0.05).614bp探針可檢測到灰度值變化的6條主帶中的帶9、12和13,胃泌素處理後,此3條主帶的灰度值明顯降低(P＜0.05).800bp探針可檢測到灰度值變化的6條主帶中的帶9、12和14,胃泌素處理後,僅帶14的灰度值明顯降低(P＜0.05).614bp和800bp探針均未檢齣帶15和帶16.結論 胃癌細胞SGC7901Reg Ⅰ基因錶達由多箇轉錄因子協同調控.降低幾箇轉錄因子的結閤活性可能是胃泌素上調胃癌細胞SGC7901Reg Ⅰ基因錶達的途徑之一.
목적 탐토위비소대위암세포SGC7901 Reg Ⅰ(Reg Ⅰ)기인전록인자적효응.방법 응용소식PCR기술종위암세포SGC7901기인조DNA확증Reg Ⅰ기인계동자1414bp편단,장해편단삽입pMD19-T재체,서렬분석감정.응용수궤인물법이지고신분별표기1414bp급기HindⅢ매절800bp화614bp편단,경령민도검측후,작위탐침.응용Genomatix MatInspector재선분석연건분석Reg Ⅰ기인계동자1414bp편단적전록인자결합위점.분별이10-7 mol/L화10-8mol/L위비소G-17처리위암세포SGC7901 48h,제취핵단백.응용DNA-단백질인적법(Southern blotting),분별이지고신표기적1414bp、800bp화614bp편단위탐침검측위비소대위암세포SGC7901 Reg Ⅰ기인전록인자적효응.결과 1414bp탐침가검측도20조단백주대.위비소부육후,대형몰유변화,단시일사조대적회도치개변,대9、12、13、14、15화16적회도치명현강저(P＜0.05)；불동농도위비소처리조지간상술6개조대적회도치차이불명현(P＞0.05).614bp탐침가검측도회도치변화적6조주대중적대9、12화13,위비소처리후,차3조주대적회도치명현강저(P＜0.05).800bp탐침가검측도회도치변화적6조주대중적대9、12화14,위비소처리후,부대14적회도치명현강저(P＜0.05).614bp화800bp탐침균미검출대15화대16.결론 위암세포SGC7901Reg Ⅰ기인표체유다개전록인자협동조공.강저궤개전록인자적결합활성가능시위비소상조위암세포SGC7901Reg Ⅰ기인표체적도경지일.
