解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2013年
2期
189-193
,共5页
张先平%张贵海%文坤明%刘俊%徐春燕%王璐%姜蓉%王亚平
張先平%張貴海%文坤明%劉俊%徐春燕%王璐%薑蓉%王亞平
장선평%장귀해%문곤명%류준%서춘연%왕로%강용%왕아평
衰老%造血干细胞%氧化低密度脂蛋白%细胞周期%流式细胞术%小鼠
衰老%造血榦細胞%氧化低密度脂蛋白%細胞週期%流式細胞術%小鼠
쇠로%조혈간세포%양화저밀도지단백%세포주기%류식세포술%소서
目的 观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对造血干细胞(HSCs)细胞周期调控基因p16、p21、CDK2、CDK4及细胞周期蛋白(cyclinD)表达的影响,探讨ox-LDL诱导HSCs衰老的可能分子机制.方法 采用免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+ HSCs,并与ox-LDL共培养,通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老HSCs,四唑氮盐(MTS)比色法与多向造血祖细胞(CFU-Mix)混合集落培养检测HSCs自我更新能力和多向分化潜能,流式细胞术分析细胞周期分布,荧光定量PCR及Western blotting检测HSCs p16、p21、CDK2、CDK4及cyclinD表达.结果 与对照组比较,ox-LDL能增加HSCs SA-β-Gal染色阳性细胞率；促进HSCs停滞于G1期,G0/G1期细胞增多、S期细胞减少,减弱HSCs自我更新与多向分化能力；ox-LDL能上调HSCs p16和p21 mRNA及蛋白表达水平,下调CDK4及cyclinD蛋白表达,而对CDK2蛋白表达无影响.结论 ox-LDL能通过上调p16、p21表达及下调CDK4、cyclinD表达,在体外促进HSCs衰老.
目的 觀察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)對造血榦細胞(HSCs)細胞週期調控基因p16、p21、CDK2、CDK4及細胞週期蛋白(cyclinD)錶達的影響,探討ox-LDL誘導HSCs衰老的可能分子機製.方法 採用免疫磁性分選法分離純化小鼠Sca-1+ HSCs,併與ox-LDL共培養,通過衰老相關β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色檢測衰老HSCs,四唑氮鹽(MTS)比色法與多嚮造血祖細胞(CFU-Mix)混閤集落培養檢測HSCs自我更新能力和多嚮分化潛能,流式細胞術分析細胞週期分佈,熒光定量PCR及Western blotting檢測HSCs p16、p21、CDK2、CDK4及cyclinD錶達.結果 與對照組比較,ox-LDL能增加HSCs SA-β-Gal染色暘性細胞率；促進HSCs停滯于G1期,G0/G1期細胞增多、S期細胞減少,減弱HSCs自我更新與多嚮分化能力；ox-LDL能上調HSCs p16和p21 mRNA及蛋白錶達水平,下調CDK4及cyclinD蛋白錶達,而對CDK2蛋白錶達無影響.結論 ox-LDL能通過上調p16、p21錶達及下調CDK4、cyclinD錶達,在體外促進HSCs衰老.
목적 관찰양화저밀도지단백(ox-LDL)대조혈간세포(HSCs)세포주기조공기인p16、p21、CDK2、CDK4급세포주기단백(cyclinD)표체적영향,탐토ox-LDL유도HSCs쇠로적가능분자궤제.방법 채용면역자성분선법분리순화소서Sca-1+ HSCs,병여ox-LDL공배양,통과쇠로상관β-반유당감매(SA-β-Gal)염색검측쇠로HSCs,사서담염(MTS)비색법여다향조혈조세포(CFU-Mix)혼합집락배양검측HSCs자아경신능력화다향분화잠능,류식세포술분석세포주기분포,형광정량PCR급Western blotting검측HSCs p16、p21、CDK2、CDK4급cyclinD표체.결과 여대조조비교,ox-LDL능증가HSCs SA-β-Gal염색양성세포솔；촉진HSCs정체우G1기,G0/G1기세포증다、S기세포감소,감약HSCs자아경신여다향분화능력；ox-LDL능상조HSCs p16화p21 mRNA급단백표체수평,하조CDK4급cyclinD단백표체,이대CDK2단백표체무영향.결론 ox-LDL능통과상조p16、p21표체급하조CDK4、cyclinD표체,재체외촉진HSCs쇠로.
