CAJ | 학술논문

目的构建针对表皮生长因子受体(EGFR)的shRNA质粒载体,转染人子宫内膜癌Ishikawa细胞株,检测RNA干扰对抑制EGFR基因表达及子宫内膜癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响.方法体外构建针对EGFR的shRNA质粒(pRNAT-EGFRshRNA),脂质体法转染Ishikawa细胞.实验设阴性对照组(未经任何转染)、pRNAT-EGFRneg组(空白质粒载体)、pRNAT-EGFR1组、pRNAT-EGFR2组和pRNAT-EGFR3组.采用实时荧光定量RT-PCR和Western blotting技术检测EGFR mRNA及蛋白的表达变化,并检测转染前后Ishikawa细胞中EMT相关指标E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化.结果 pRNAT-EGFR2组和pRNAT-EGFR3组细胞EGFR mRNA和蛋白的表达量均明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；pRNAT-EGFR1组EGFR mRNA和蛋白的表达量与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).RNA干扰抑制EGFR基因表达后,与阴性对照组比较,pRNAT-EGFR2组和pRNAT-EGFR3组Ishikawa细胞上皮标志物E-eadherin和α-catenin的mRNA及蛋白表达水平均上调(P＜0.05),间叶标志物N-cadherin和Vimentin的mRNA及蛋白表达水平则显著下调(P＜0.01).结论抑制EGFR基因表达可部分逆转子宫内膜癌细胞EMT相关基因的表达.
목적 구건침대표피생장인자수체(EGFR)적shRNA질립재체,전염인자궁내막암Ishikawa세포주,검측RNA간우대억제EGFR기인표체급자궁내막암세포상피간질전화(EMT)적영향.방법 체외구건침대EGFR적shRNA질립(pRNAT-EGFRshRNA),지질체법전염Ishikawa세포.실험설음성대조조(미경임하전염)、pRNAT-EGFRneg조(공백질립재체)、pRNAT-EGFR1조、pRNAT-EGFR2조화pRNAT-EGFR3조.채용실시형광정량RT-PCR화Western blotting기술검측EGFR mRNA급단백적표체변화,병검측전염전후Ishikawa세포중EMT상관지표E-cadherin、α-catenin、N-cadherin화Vimentin적표체변화.결과 pRNAT-EGFR2조화pRNAT-EGFR3조세포EGFR mRNA화단백적표체량균명현저우음성대조조,차이유통계학의의(P＜0.05)；pRNAT-EGFR1조EGFR mRNA화단백적표체량여음성대조조상비,차이무통계학의의(P＞0.05).RNA간우억제EGFR기인표체후,여음성대조조비교,pRNAT-EGFR2조화pRNAT-EGFR3조Ishikawa세포상피표지물E-eadherin화α-catenin적mRNA급단백표체수평균상조(P＜0.05),간협표지물N-cadherin화Vimentin적mRNA급단백표체수평칙현저하조(P＜0.01).결론 억제EGFR기인표체가부분역전자궁내막암세포EMT상관기인적표체.