上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2013年
4期
404-408
,共5页
张萍%应磊%钱关祥%徐让
張萍%應磊%錢關祥%徐讓
장평%응뢰%전관상%서양
GAL4/VP16%人工转录因子%增强型绿色荧光蛋白
GAL4/VP16%人工轉錄因子%增彊型綠色熒光蛋白
GAL4/VP16%인공전록인자%증강형록색형광단백
目的 构建含有融合转录因子GAL4/VP16的表达载体和含有上游激活序列(UAS)启动子驱动报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达载体组成的GAL4/VP16-UAS系统,观察融合转录因子GAL4/VP16的活性.方法 构建含有融合转录因子GAL4/VP16的表达载体pcDNA3-GAL4/VP16,含有5个拷贝UAS串联排列序列和腺病毒E1b基因核心启动子的人工杂合启动子驱动报告基因EGFP的表达载体pGL3-G5E1b-TATA-EGFP,利用脂质体将两种载体瞬时转染Hep3B和HEK293细胞,48 h后采用RT-PCR和流式细胞术检测EGFP的表达,观察GAL4/VP16融合转录因子对G5E1B-TATA的转录调节作用.结果 在GAL4/VP16融合转录因子存在的情况下,G5E1b-TATA启动子活性明显上调,甚至可以达到巨细胞病毒(CMV)启动子的活性程度.结论 GAL4/VP16融合转录因子具有上调G5E1B-TATA启动子转录活性的作用,并且该转录活性足以达到驱动下游目的基因高效表达的水平,在基因治疗和基因功能的研究中具有一定的应用潜力.
目的 構建含有融閤轉錄因子GAL4/VP16的錶達載體和含有上遊激活序列(UAS)啟動子驅動報告基因增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)的錶達載體組成的GAL4/VP16-UAS繫統,觀察融閤轉錄因子GAL4/VP16的活性.方法 構建含有融閤轉錄因子GAL4/VP16的錶達載體pcDNA3-GAL4/VP16,含有5箇拷貝UAS串聯排列序列和腺病毒E1b基因覈心啟動子的人工雜閤啟動子驅動報告基因EGFP的錶達載體pGL3-G5E1b-TATA-EGFP,利用脂質體將兩種載體瞬時轉染Hep3B和HEK293細胞,48 h後採用RT-PCR和流式細胞術檢測EGFP的錶達,觀察GAL4/VP16融閤轉錄因子對G5E1B-TATA的轉錄調節作用.結果 在GAL4/VP16融閤轉錄因子存在的情況下,G5E1b-TATA啟動子活性明顯上調,甚至可以達到巨細胞病毒(CMV)啟動子的活性程度.結論 GAL4/VP16融閤轉錄因子具有上調G5E1B-TATA啟動子轉錄活性的作用,併且該轉錄活性足以達到驅動下遊目的基因高效錶達的水平,在基因治療和基因功能的研究中具有一定的應用潛力.
목적 구건함유융합전록인자GAL4/VP16적표체재체화함유상유격활서렬(UAS)계동자구동보고기인증강형록색형광단백(EGFP)적표체재체조성적GAL4/VP16-UAS계통,관찰융합전록인자GAL4/VP16적활성.방법 구건함유융합전록인자GAL4/VP16적표체재체pcDNA3-GAL4/VP16,함유5개고패UAS천련배렬서렬화선병독E1b기인핵심계동자적인공잡합계동자구동보고기인EGFP적표체재체pGL3-G5E1b-TATA-EGFP,이용지질체장량충재체순시전염Hep3B화HEK293세포,48 h후채용RT-PCR화류식세포술검측EGFP적표체,관찰GAL4/VP16융합전록인자대G5E1B-TATA적전록조절작용.결과 재GAL4/VP16융합전록인자존재적정황하,G5E1b-TATA계동자활성명현상조,심지가이체도거세포병독(CMV)계동자적활성정도.결론 GAL4/VP16융합전록인자구유상조G5E1B-TATA계동자전록활성적작용,병차해전록활성족이체도구동하유목적기인고효표체적수평,재기인치료화기인공능적연구중구유일정적응용잠력.
