中国计量学院学报
中國計量學院學報
중국계량학원학보
JOURNAL OF CHINA INSTITUTE OF METROLOGY
2012年
4期
403-409
,共7页
黑曲霉%内切聚半乳糖醛酸酶%克隆%表达%酶学性质
黑麯黴%內切聚半乳糖醛痠酶%剋隆%錶達%酶學性質
흑곡매%내절취반유당철산매%극륭%표체%매학성질
采用Trizol法提取黑曲霉(Aspergillus niger JL-15)的总RNA,RT-PCR扩增到黑曲霉内切聚半乳糖醛酸酶A基因(PgaA),PgaA全长1113 bp,编码370个氨基酸残基.pgaA经Eco RI和NotI双酶切,定向插入到表达载体pET-32a(+)中,并转化Escherichia coli Rosetta-gami B(DE3),重组子经IPTG诱导,其表达产物(rePGA)果胶酶活性最高为637.0 U/mg.酶学性质研究表明,rePGA的最适温度为60℃,热稳定性较差,最适pH为pH 5.0;Ca2+对其活性具有显著促进作用,而Fe3+和Mg2+对其活性具有显著抑制作用；SDS-PGAE结果表明,rePGA的相对分子质量约为40 500Da; rePGA的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)分别为4.05 mg/mL和39.37 μmol/(mL·min),rePGA能快速降低果胶溶液的粘度,符合其内切作用模式特点.
採用Trizol法提取黑麯黴(Aspergillus niger JL-15)的總RNA,RT-PCR擴增到黑麯黴內切聚半乳糖醛痠酶A基因(PgaA),PgaA全長1113 bp,編碼370箇氨基痠殘基.pgaA經Eco RI和NotI雙酶切,定嚮插入到錶達載體pET-32a(+)中,併轉化Escherichia coli Rosetta-gami B(DE3),重組子經IPTG誘導,其錶達產物(rePGA)果膠酶活性最高為637.0 U/mg.酶學性質研究錶明,rePGA的最適溫度為60℃,熱穩定性較差,最適pH為pH 5.0;Ca2+對其活性具有顯著促進作用,而Fe3+和Mg2+對其活性具有顯著抑製作用；SDS-PGAE結果錶明,rePGA的相對分子質量約為40 500Da; rePGA的米氏常數(Km)和最大反應速度(Vmax)分彆為4.05 mg/mL和39.37 μmol/(mL·min),rePGA能快速降低果膠溶液的粘度,符閤其內切作用模式特點.
채용Trizol법제취흑곡매(Aspergillus niger JL-15)적총RNA,RT-PCR확증도흑곡매내절취반유당철산매A기인(PgaA),PgaA전장1113 bp,편마370개안기산잔기.pgaA경Eco RI화NotI쌍매절,정향삽입도표체재체pET-32a(+)중,병전화Escherichia coli Rosetta-gami B(DE3),중조자경IPTG유도,기표체산물(rePGA)과효매활성최고위637.0 U/mg.매학성질연구표명,rePGA적최괄온도위60℃,열은정성교차,최괄pH위pH 5.0;Ca2+대기활성구유현저촉진작용,이Fe3+화Mg2+대기활성구유현저억제작용；SDS-PGAE결과표명,rePGA적상대분자질량약위40 500Da; rePGA적미씨상수(Km)화최대반응속도(Vmax)분별위4.05 mg/mL화39.37 μmol/(mL·min),rePGA능쾌속강저과효용액적점도,부합기내절작용모식특점.
