畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
12期
35-38
,共4页
孟凡华%王海涛%房君%邢燕平%周欢敏
孟凡華%王海濤%房君%邢燕平%週歡敏
맹범화%왕해도%방군%형연평%주환민
绵羊角蛋白Kap6.1%启动子克隆%转染%山羊胎儿皮肤成纤维细胞
綿羊角蛋白Kap6.1%啟動子剋隆%轉染%山羊胎兒皮膚成纖維細胞
면양각단백Kap6.1%계동자극륭%전염%산양태인피부성섬유세포
克隆绵羊角蛋白Kap6.1启动子,为下一步构建真核毛囊特异表达载体奠定基础.以绵羊基因组为模板,利用PCR方法克隆绵羊角蛋白结合蛋白Kap6.1启动子,并用此启动子置换真核表达载体pEGFP-N1的原始启动子CMV,构建pKap-EGFP质粒,通过转染内蒙古阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞鉴定启动子活性.结果显示:克隆所获得的启动子序列与NCBI上发表序列匹配率为99.6％,启动子的特征序列CAAT框和TATA框完整,并且分别位于序列的921位和878位,pKap-EGFP质粒转染绒山羊成纤维细胞后Kap能启动GFP的表达,与对照组相比活性良好.本研究通过克隆获得了绵羊角蛋白结合蛋白Kap6.1启动子,并观测到其能启动GFP在山羊胎儿皮肤成纤维细胞中表达.
剋隆綿羊角蛋白Kap6.1啟動子,為下一步構建真覈毛囊特異錶達載體奠定基礎.以綿羊基因組為模闆,利用PCR方法剋隆綿羊角蛋白結閤蛋白Kap6.1啟動子,併用此啟動子置換真覈錶達載體pEGFP-N1的原始啟動子CMV,構建pKap-EGFP質粒,通過轉染內矇古阿爾巴斯絨山羊胎兒皮膚成纖維細胞鑒定啟動子活性.結果顯示:剋隆所穫得的啟動子序列與NCBI上髮錶序列匹配率為99.6％,啟動子的特徵序列CAAT框和TATA框完整,併且分彆位于序列的921位和878位,pKap-EGFP質粒轉染絨山羊成纖維細胞後Kap能啟動GFP的錶達,與對照組相比活性良好.本研究通過剋隆穫得瞭綿羊角蛋白結閤蛋白Kap6.1啟動子,併觀測到其能啟動GFP在山羊胎兒皮膚成纖維細胞中錶達.
극륭면양각단백Kap6.1계동자,위하일보구건진핵모낭특이표체재체전정기출.이면양기인조위모판,이용PCR방법극륭면양각단백결합단백Kap6.1계동자,병용차계동자치환진핵표체재체pEGFP-N1적원시계동자CMV,구건pKap-EGFP질립,통과전염내몽고아이파사융산양태인피부성섬유세포감정계동자활성.결과현시:극륭소획득적계동자서렬여NCBI상발표서렬필배솔위99.6％,계동자적특정서렬CAAT광화TATA광완정,병차분별위우서렬적921위화878위,pKap-EGFP질립전염융산양성섬유세포후Kap능계동GFP적표체,여대조조상비활성량호.본연구통과극륭획득료면양각단백결합단백Kap6.1계동자,병관측도기능계동GFP재산양태인피부성섬유세포중표체.
