畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
12期
4-9
,共6页
李美青%康超%黄时海%覃兆鲜%路新梅%乔树叶%李湘萍%石德顺
李美青%康超%黃時海%覃兆鮮%路新梅%喬樹葉%李湘萍%石德順
리미청%강초%황시해%담조선%로신매%교수협%리상평%석덕순
布氏杆菌病%水牛CD14%RNA干扰%慢病毒载体
佈氏桿菌病%水牛CD14%RNA榦擾%慢病毒載體
포씨간균병%수우CD14%RNA간우%만병독재체
研究慢病毒载体介导的RNA干扰对水牛CD14基因表达的影响,设计并筛选具有抑制作用的靶序列.将真核表达载体pDsRed-N1-buffalo CD14转染293细胞株,建立稳定表达水牛CD14基因细胞系.同时设计5条水牛CD14 shRNA (319/421/755/970/1 041)以及1条阴性对照序列(NC-1864),构建慢病毒重组质粒pSicoR-GFP-sh RNA.采用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染293T细胞包装慢病毒,并进行滴度测定.最后,通过对慢病毒感染的pDsRedl-N1-buffalo CD14-293细胞进行QRT-PCR检测,筛选具有抑制效果的shRNA.结果显示:在各感染细胞组中,外源水牛CD14基因mRNA的表达均受到不同程度的抑制,其中,CD14 shRNA-970靶点的干扰效率最高,达到79.3％ (P＜0.01).成功筛选出具有较高抑制效果的水牛CD14 shRNA靶序列,为研究CD14基因在布氏杆菌所致炎症反应中的作用,建立家畜布氏杆菌病防治新方法奠定了基础.
研究慢病毒載體介導的RNA榦擾對水牛CD14基因錶達的影響,設計併篩選具有抑製作用的靶序列.將真覈錶達載體pDsRed-N1-buffalo CD14轉染293細胞株,建立穩定錶達水牛CD14基因細胞繫.同時設計5條水牛CD14 shRNA (319/421/755/970/1 041)以及1條陰性對照序列(NC-1864),構建慢病毒重組質粒pSicoR-GFP-sh RNA.採用燐痠鈣沉澱法將三質粒共轉染293T細胞包裝慢病毒,併進行滴度測定.最後,通過對慢病毒感染的pDsRedl-N1-buffalo CD14-293細胞進行QRT-PCR檢測,篩選具有抑製效果的shRNA.結果顯示:在各感染細胞組中,外源水牛CD14基因mRNA的錶達均受到不同程度的抑製,其中,CD14 shRNA-970靶點的榦擾效率最高,達到79.3％ (P＜0.01).成功篩選齣具有較高抑製效果的水牛CD14 shRNA靶序列,為研究CD14基因在佈氏桿菌所緻炎癥反應中的作用,建立傢畜佈氏桿菌病防治新方法奠定瞭基礎.
연구만병독재체개도적RNA간우대수우CD14기인표체적영향,설계병사선구유억제작용적파서렬.장진핵표체재체pDsRed-N1-buffalo CD14전염293세포주,건립은정표체수우CD14기인세포계.동시설계5조수우CD14 shRNA (319/421/755/970/1 041)이급1조음성대조서렬(NC-1864),구건만병독중조질립pSicoR-GFP-sh RNA.채용린산개침정법장삼질립공전염293T세포포장만병독,병진행적도측정.최후,통과대만병독감염적pDsRedl-N1-buffalo CD14-293세포진행QRT-PCR검측,사선구유억제효과적shRNA.결과현시:재각감염세포조중,외원수우CD14기인mRNA적표체균수도불동정도적억제,기중,CD14 shRNA-970파점적간우효솔최고,체도79.3％ (P＜0.01).성공사선출구유교고억제효과적수우CD14 shRNA파서렬,위연구CD14기인재포씨간균소치염증반응중적작용,건립가축포씨간균병방치신방법전정료기출.
