华侨大学学报(自然科学版)
華僑大學學報(自然科學版)
화교대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF HUAQIAO UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2013年
1期
68-71
,共4页
9型重组腺相关病毒%Kallistatin%表达效率%人脐静脉血管内皮细胞
9型重組腺相關病毒%Kallistatin%錶達效率%人臍靜脈血管內皮細胞
9형중조선상관병독%Kallistatin%표체효솔%인제정맥혈관내피세포
采用三质粒磷酸钙共转染生产系统,制备出可以表达内源性抗肿瘤血管生成因子(Kallistatin)的9型重组腺相关病毒(rAAV2/9)和2型重组腺相关病毒(rAAV2/2).rAAV经银染法鉴定其纯度;采用Western Blotting法比较rAAV2/9和rAAV2/2外壳蛋白的大小;qPCR方法检测rAAV的滴度.使用rAAV2/9-Kal-listatin和rAAV2/2-Kallistatin分别感染人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)后,RT-PCR和ELISA法分别检测Kallistatin的mRNA和蛋白表达水平.结果表明:纯化的病毒纯度达到98%以上;rAAV9外壳蛋白比rAAV2的大.感染HUVEC后,rAAV2/9介导Kallistatin在mRNA和蛋白表达水平都要比rAAV2/2高.
採用三質粒燐痠鈣共轉染生產繫統,製備齣可以錶達內源性抗腫瘤血管生成因子(Kallistatin)的9型重組腺相關病毒(rAAV2/9)和2型重組腺相關病毒(rAAV2/2).rAAV經銀染法鑒定其純度;採用Western Blotting法比較rAAV2/9和rAAV2/2外殼蛋白的大小;qPCR方法檢測rAAV的滴度.使用rAAV2/9-Kal-listatin和rAAV2/2-Kallistatin分彆感染人臍靜脈血管內皮細胞(HUVEC)後,RT-PCR和ELISA法分彆檢測Kallistatin的mRNA和蛋白錶達水平.結果錶明:純化的病毒純度達到98%以上;rAAV9外殼蛋白比rAAV2的大.感染HUVEC後,rAAV2/9介導Kallistatin在mRNA和蛋白錶達水平都要比rAAV2/2高.
채용삼질립린산개공전염생산계통,제비출가이표체내원성항종류혈관생성인자(Kallistatin)적9형중조선상관병독(rAAV2/9)화2형중조선상관병독(rAAV2/2).rAAV경은염법감정기순도;채용Western Blotting법비교rAAV2/9화rAAV2/2외각단백적대소;qPCR방법검측rAAV적적도.사용rAAV2/9-Kal-listatin화rAAV2/2-Kallistatin분별감염인제정맥혈관내피세포(HUVEC)후,RT-PCR화ELISA법분별검측Kallistatin적mRNA화단백표체수평.결과표명:순화적병독순도체도98%이상;rAAV9외각단백비rAAV2적대.감염HUVEC후,rAAV2/9개도Kallistatin재mRNA화단백표체수평도요비rAAV2/2고.