实用医学杂志
實用醫學雜誌
실용의학잡지
THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE
2012年
9期
1422-1425
,共4页
王金冬%何俊明%方文娟%李玉军%王宝英%周淑如%张凤民
王金鼕%何俊明%方文娟%李玉軍%王寶英%週淑如%張鳳民
왕금동%하준명%방문연%리옥군%왕보영%주숙여%장봉민
凝血致活酶%基因克隆%pEGFP-N1%C6细胞
凝血緻活酶%基因剋隆%pEGFP-N1%C6細胞
응혈치활매%기인극륭%pEGFP-N1%C6세포
目的:克隆大鼠组织因子(tissue factor,TF)基因,构建真核表达载体pEGFP-N1-TF,转染C6大鼠神经胶质瘤细胞并检测转染细胞内TF表达水平.方法:采用RT-PCR法从Wistar大鼠肺组织中扩增TF基因,克隆到真核表达载体pEGFP-N1上.通过测序鉴定重组质粒中插入TF的完整性和可靠性.应用脂质体法将鉴定正确的重组质粒转入C6细胞中,荧光显微镜下观察EGFP报告基因的表达强度和转染效率,并对转染细胞的TF-eGFP融合蛋白进行Western blot检测.结果:成功构建pEGFP-N1-TF真核表达载体,转染C6细胞24 h后,在荧光显微镜下可以观测到荧光,并通过Western blot技术检测到TF-eGFP融合蛋白的表达.结论:重组真核表达载体pEGFP-N1-TF构建成功,转染C6细胞后获得了良好的瞬时表达.
目的:剋隆大鼠組織因子(tissue factor,TF)基因,構建真覈錶達載體pEGFP-N1-TF,轉染C6大鼠神經膠質瘤細胞併檢測轉染細胞內TF錶達水平.方法:採用RT-PCR法從Wistar大鼠肺組織中擴增TF基因,剋隆到真覈錶達載體pEGFP-N1上.通過測序鑒定重組質粒中插入TF的完整性和可靠性.應用脂質體法將鑒定正確的重組質粒轉入C6細胞中,熒光顯微鏡下觀察EGFP報告基因的錶達彊度和轉染效率,併對轉染細胞的TF-eGFP融閤蛋白進行Western blot檢測.結果:成功構建pEGFP-N1-TF真覈錶達載體,轉染C6細胞24 h後,在熒光顯微鏡下可以觀測到熒光,併通過Western blot技術檢測到TF-eGFP融閤蛋白的錶達.結論:重組真覈錶達載體pEGFP-N1-TF構建成功,轉染C6細胞後穫得瞭良好的瞬時錶達.
목적:극륭대서조직인자(tissue factor,TF)기인,구건진핵표체재체pEGFP-N1-TF,전염C6대서신경효질류세포병검측전염세포내TF표체수평.방법:채용RT-PCR법종Wistar대서폐조직중확증TF기인,극륭도진핵표체재체pEGFP-N1상.통과측서감정중조질립중삽입TF적완정성화가고성.응용지질체법장감정정학적중조질립전입C6세포중,형광현미경하관찰EGFP보고기인적표체강도화전염효솔,병대전염세포적TF-eGFP융합단백진행Western blot검측.결과:성공구건pEGFP-N1-TF진핵표체재체,전염C6세포24 h후,재형광현미경하가이관측도형광,병통과Western blot기술검측도TF-eGFP융합단백적표체.결론:중조진핵표체재체pEGFP-N1-TF구건성공,전염C6세포후획득료량호적순시표체.
