上海医学
上海醫學
상해의학
SHANGHAI MEDICAL JOURNAL
2012年
11期
935-939,前插3
,共6页
毛联钢%李克强%卓文莹%戴晓宇%余永明%乐东海%冯伟云
毛聯鋼%李剋彊%卓文瑩%戴曉宇%餘永明%樂東海%馮偉雲
모련강%리극강%탁문형%대효우%여영명%악동해%풍위운
RON%HT29细胞%RNA干扰%慢病毒载体
RON%HT29細胞%RNA榦擾%慢病毒載體
RON%HT29세포%RNA간우%만병독재체
目的 研究慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)对大肠癌细胞RON基因的干扰效率,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株.方法 应用实时聚合酶链反应(PCR)检测大肠癌细胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RON mRNA表达情况,筛选出表达丰度能满足RNAi的大肠癌靶细胞HT29.根据人RON基因序列,构建4种慢病毒载体质粒pGCSIL/RON-短发夹RNA(shRNA),转染包装细胞293T,获得4种重组慢病毒pGCSIL/RON-shRNA,分别感染HT29细胞.应用实时PCR检测各组HT29细胞RON mRNA表达情况,筛选出RON干扰效率最高的一种shRNA慢病毒载体质粒,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株HT29/RON-shRNA.结果 DLD-1、HCT116、RKO、SW480、HT29细胞RON表达丰度能满足RNAi的需要,选择HT29细胞作为RNAi的靶细胞.阴性对照病毒感染的细胞样品相对正常未感染病毒的细胞目的基因的相对表达水平为(94±5)％,RON shRNA-1靶点病毒感染的细胞为(86±5)％,RONshRNA-2靶点病毒感染的细胞为(67±6)％,RONshRNA-3靶点病毒感染的细胞为(63±6)％,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞为(30±8)％,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞的表达水平显著低于其他细胞(P值均＜0.01),其对目的基因的沉默效果达到(70±8)％.结论 慢病毒介导RNAi能显著抑制大肠癌细胞HT29的RON基因的表达,慢病毒载体介导的RNAi是一种高效的“基因沉默”的手段.
目的 研究慢病毒介導的RNA榦擾(RNAi)對大腸癌細胞RON基因的榦擾效率,構建RON基因穩定沉默的大腸癌細胞株.方法 應用實時聚閤酶鏈反應(PCR)檢測大腸癌細胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RON mRNA錶達情況,篩選齣錶達豐度能滿足RNAi的大腸癌靶細胞HT29.根據人RON基因序列,構建4種慢病毒載體質粒pGCSIL/RON-短髮夾RNA(shRNA),轉染包裝細胞293T,穫得4種重組慢病毒pGCSIL/RON-shRNA,分彆感染HT29細胞.應用實時PCR檢測各組HT29細胞RON mRNA錶達情況,篩選齣RON榦擾效率最高的一種shRNA慢病毒載體質粒,構建RON基因穩定沉默的大腸癌細胞株HT29/RON-shRNA.結果 DLD-1、HCT116、RKO、SW480、HT29細胞RON錶達豐度能滿足RNAi的需要,選擇HT29細胞作為RNAi的靶細胞.陰性對照病毒感染的細胞樣品相對正常未感染病毒的細胞目的基因的相對錶達水平為(94±5)％,RON shRNA-1靶點病毒感染的細胞為(86±5)％,RONshRNA-2靶點病毒感染的細胞為(67±6)％,RONshRNA-3靶點病毒感染的細胞為(63±6)％,RONshRNA-4靶點病毒感染的細胞為(30±8)％,RONshRNA-4靶點病毒感染的細胞的錶達水平顯著低于其他細胞(P值均＜0.01),其對目的基因的沉默效果達到(70±8)％.結論 慢病毒介導RNAi能顯著抑製大腸癌細胞HT29的RON基因的錶達,慢病毒載體介導的RNAi是一種高效的“基因沉默”的手段.
목적 연구만병독개도적RNA간우(RNAi)대대장암세포RON기인적간우효솔,구건RON기인은정침묵적대장암세포주.방법 응용실시취합매련반응(PCR)검측대장암세포DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29적RON mRNA표체정황,사선출표체봉도능만족RNAi적대장암파세포HT29.근거인RON기인서렬,구건4충만병독재체질립pGCSIL/RON-단발협RNA(shRNA),전염포장세포293T,획득4충중조만병독pGCSIL/RON-shRNA,분별감염HT29세포.응용실시PCR검측각조HT29세포RON mRNA표체정황,사선출RON간우효솔최고적일충shRNA만병독재체질립,구건RON기인은정침묵적대장암세포주HT29/RON-shRNA.결과 DLD-1、HCT116、RKO、SW480、HT29세포RON표체봉도능만족RNAi적수요,선택HT29세포작위RNAi적파세포.음성대조병독감염적세포양품상대정상미감염병독적세포목적기인적상대표체수평위(94±5)％,RON shRNA-1파점병독감염적세포위(86±5)％,RONshRNA-2파점병독감염적세포위(67±6)％,RONshRNA-3파점병독감염적세포위(63±6)％,RONshRNA-4파점병독감염적세포위(30±8)％,RONshRNA-4파점병독감염적세포적표체수평현저저우기타세포(P치균＜0.01),기대목적기인적침묵효과체도(70±8)％.결론 만병독개도RNAi능현저억제대장암세포HT29적RON기인적표체,만병독재체개도적RNAi시일충고효적“기인침묵”적수단.
