中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2013年
1期
119-122
,共4页
小细胞肺癌%ABCE1%SiRNA
小細胞肺癌%ABCE1%SiRNA
소세포폐암%ABCE1%SiRNA
目的 构建ABCE1基因的SiRNA表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,研究ABCE1基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移能力的影响.方法 根据ABCE1的DNA序列设计3对SiRNA引物,构建携带红色荧光的重组质粒ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N.采用lipofect2000法将载体ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N转染入小细胞肺癌细胞中.转染48 h后应用Western印迹法检测转染后ABCE1蛋白表达.MTT法、Transwell小室、划痕实验检测NCI-H446细胞在转染前后的增殖能力、侵袭能力、迁移能力的改变.结果 经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-SiRNA表达载体构建成功.转染ABCE1-SiRNA后的小细胞肺癌细胞内可见红色荧光.在转染ABCE1-SiRNA-N的NCI-H446细胞中ABCE1基因呈高表达,而转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2的细胞呈低表达.MTT实验提示,转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2的小细胞肺癌细胞与转染ABCE1-SiRNA-N的同类细胞相比增殖能力受到明显抑制.Transwell实验发现转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2后的小细胞肺癌细胞穿膜细胞数较未转染和转染ABCE1-SiRNA-N组细胞明显减少.划痕实验显示转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2后的小细胞肺癌细胞迁移速度明显慢于转染ABCE1-SiRNA-N的细胞和对照组细胞.结论 成功构建了ABCE1基因SiRNA表达载体ABCE1-SiRNA.ABCE1基因SiRNA表达载体ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2转染人小细胞肺癌细胞后不仅可抑制ABCE1基因的表达,而且还能明显的抑制细胞生长,使其增殖能力下降,降低其侵袭、迁移能力.
目的 構建ABCE1基因的SiRNA錶達載體,通過將載體轉染入小細胞肺癌細胞株NCI-H446,研究ABCE1基因對小細胞肺癌增殖、侵襲、遷移能力的影響.方法 根據ABCE1的DNA序列設計3對SiRNA引物,構建攜帶紅色熒光的重組質粒ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N.採用lipofect2000法將載體ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N轉染入小細胞肺癌細胞中.轉染48 h後應用Western印跡法檢測轉染後ABCE1蛋白錶達.MTT法、Transwell小室、劃痕實驗檢測NCI-H446細胞在轉染前後的增殖能力、侵襲能力、遷移能力的改變.結果 經酶切和DNA測序驗證,證實ABCE1-SiRNA錶達載體構建成功.轉染ABCE1-SiRNA後的小細胞肺癌細胞內可見紅色熒光.在轉染ABCE1-SiRNA-N的NCI-H446細胞中ABCE1基因呈高錶達,而轉染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2的細胞呈低錶達.MTT實驗提示,轉染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2的小細胞肺癌細胞與轉染ABCE1-SiRNA-N的同類細胞相比增殖能力受到明顯抑製.Transwell實驗髮現轉染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2後的小細胞肺癌細胞穿膜細胞數較未轉染和轉染ABCE1-SiRNA-N組細胞明顯減少.劃痕實驗顯示轉染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2後的小細胞肺癌細胞遷移速度明顯慢于轉染ABCE1-SiRNA-N的細胞和對照組細胞.結論 成功構建瞭ABCE1基因SiRNA錶達載體ABCE1-SiRNA.ABCE1基因SiRNA錶達載體ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2轉染人小細胞肺癌細胞後不僅可抑製ABCE1基因的錶達,而且還能明顯的抑製細胞生長,使其增殖能力下降,降低其侵襲、遷移能力.
목적 구건ABCE1기인적SiRNA표체재체,통과장재체전염입소세포폐암세포주NCI-H446,연구ABCE1기인대소세포폐암증식、침습、천이능력적영향.방법 근거ABCE1적DNA서렬설계3대SiRNA인물,구건휴대홍색형광적중조질립ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N.채용lipofect2000법장재체ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N전염입소세포폐암세포중.전염48 h후응용Western인적법검측전염후ABCE1단백표체.MTT법、Transwell소실、화흔실험검측NCI-H446세포재전염전후적증식능력、침습능력、천이능력적개변.결과 경매절화DNA측서험증,증실ABCE1-SiRNA표체재체구건성공.전염ABCE1-SiRNA후적소세포폐암세포내가견홍색형광.재전염ABCE1-SiRNA-N적NCI-H446세포중ABCE1기인정고표체,이전염ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2적세포정저표체.MTT실험제시,전염ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2적소세포폐암세포여전염ABCE1-SiRNA-N적동류세포상비증식능력수도명현억제.Transwell실험발현전염ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2후적소세포폐암세포천막세포수교미전염화전염ABCE1-SiRNA-N조세포명현감소.화흔실험현시전염ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2후적소세포폐암세포천이속도명현만우전염ABCE1-SiRNA-N적세포화대조조세포.결론 성공구건료ABCE1기인SiRNA표체재체ABCE1-SiRNA.ABCE1기인SiRNA표체재체ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2전염인소세포폐암세포후불부가억제ABCE1기인적표체,이차환능명현적억제세포생장,사기증식능력하강,강저기침습、천이능력.
