医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2013年
1期
142-144
,共3页
戴春蕾%陈少隆%陈黎黎%张伟伟%林镯%陈永平
戴春蕾%陳少隆%陳黎黎%張偉偉%林鐲%陳永平
대춘뢰%진소륭%진려려%장위위%림탁%진영평
肝星状细胞%大鼠%提取%培养
肝星狀細胞%大鼠%提取%培養
간성상세포%대서%제취%배양
目的 探索SD大鼠肝星状细胞(HSCs)的提取方法,观察其生物学特性,为进一步研究它在肝纤维化和免疫应答中的可能机制奠定基础.方法 依次采用前灌注液、0.15 mg/ml的链霉蛋白酶E和0.5mg/ml的Ⅳ型胶原酶在体原位灌注消化肝脏.肝脏离体剪碎后,在0.3mg/ml链霉蛋白酶E、0.3 mg/mlⅣ型胶原酶、0.02mg/ml DNA酶Ⅰ液中37℃振荡消化20min,低速离心(30g,5min)去除残余肝实质细胞,Optiprep密度梯度离心法获得纯化的HSCs.台盼蓝排斥试验评估HSCs细胞存活率；328nm紫外光激发HSCs自发蓝绿色荧光结合光镜鉴定细胞纯度；α-SMA免疫细胞化学方法鉴定HSCs;通过光镜观察HSCs的形态学变化.结果 本方法,每只大鼠肝脏HSCs产量约8.2×106个,HSCs存活率在90％以上；原代培养24h后,纯度在85％以上；传1代后,纯度达95％以上.结论 本方法简单、经济、实用,可获得较多的大鼠HSCs.
目的 探索SD大鼠肝星狀細胞(HSCs)的提取方法,觀察其生物學特性,為進一步研究它在肝纖維化和免疫應答中的可能機製奠定基礎.方法 依次採用前灌註液、0.15 mg/ml的鏈黴蛋白酶E和0.5mg/ml的Ⅳ型膠原酶在體原位灌註消化肝髒.肝髒離體剪碎後,在0.3mg/ml鏈黴蛋白酶E、0.3 mg/mlⅣ型膠原酶、0.02mg/ml DNA酶Ⅰ液中37℃振盪消化20min,低速離心(30g,5min)去除殘餘肝實質細胞,Optiprep密度梯度離心法穫得純化的HSCs.檯盼藍排斥試驗評估HSCs細胞存活率；328nm紫外光激髮HSCs自髮藍綠色熒光結閤光鏡鑒定細胞純度；α-SMA免疫細胞化學方法鑒定HSCs;通過光鏡觀察HSCs的形態學變化.結果 本方法,每隻大鼠肝髒HSCs產量約8.2×106箇,HSCs存活率在90％以上；原代培養24h後,純度在85％以上；傳1代後,純度達95％以上.結論 本方法簡單、經濟、實用,可穫得較多的大鼠HSCs.
목적 탐색SD대서간성상세포(HSCs)적제취방법,관찰기생물학특성,위진일보연구타재간섬유화화면역응답중적가능궤제전정기출.방법 의차채용전관주액、0.15 mg/ml적련매단백매E화0.5mg/ml적Ⅳ형효원매재체원위관주소화간장.간장리체전쇄후,재0.3mg/ml련매단백매E、0.3 mg/mlⅣ형효원매、0.02mg/ml DNA매Ⅰ액중37℃진탕소화20min,저속리심(30g,5min)거제잔여간실질세포,Optiprep밀도제도리심법획득순화적HSCs.태반람배척시험평고HSCs세포존활솔；328nm자외광격발HSCs자발람록색형광결합광경감정세포순도；α-SMA면역세포화학방법감정HSCs;통과광경관찰HSCs적형태학변화.결과 본방법,매지대서간장HSCs산량약8.2×106개,HSCs존활솔재90％이상；원대배양24h후,순도재85％이상；전1대후,순도체95％이상.결론 본방법간단、경제、실용,가획득교다적대서HSCs.
