CAJ | 학술논문

以米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40基因组DNA为模版,通过PCR扩增其烯酮烯酯还原酶(AspER)基因(asper)后连接到表达载体pET32a(+)上,在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶形式表达.通过Ni-NTA亲和色谱层析纯化后,蛋白纯度提高1.9倍,回收率为60.62％.根据分子筛凝胶层析结果推算,AspER以二聚体形式存在.性质分析表明此酶为依赖于NADPH的氧化还原酶,最适pH为7.0 ～8.0,最适温度为40℃.对2-环己烯酮Km和kcat值分别为(2.45±0.36) mmol/L和(4.4±0.4)×103 s-1.底物谱分析发现AspER对马来酰亚胺及其衍生物有较高的活性,其中对2-甲基马来酰亚胺的转化率和e.e.值均高于99％.
이미곡매(Aspergillus oryzae)RIB40기인조DNA위모판,통과PCR확증기희동희지환원매(AspER)기인(asper)후련접도표체재체pET32a(+)상,재대장간균BL21(DE3)중이가용형식표체.통과Ni-NTA친화색보층석순화후,단백순도제고1.9배,회수솔위60.62％.근거분자사응효층석결과추산,AspER이이취체형식존재.성질분석표명차매위의뢰우NADPH적양화환원매,최괄pH위7.0 ～8.0,최괄온도위40℃.대2-배기희동Km화kcat치분별위(2.45±0.36) mmol/L화(4.4±0.4)×103 s-1.저물보분석발현AspER대마래선아알급기연생물유교고적활성,기중대2-갑기마래선아알적전화솔화e.e.치균고우99％.