SET基因shRNA慢病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达鉴定
SET기인shRNA만병독재체적구건급기재간세포중적표체감정
Construction and identification of lentivirus vectors interfering with SET gene expression in liver cells
  • 万方数据
    癌变·畸变·突变 암변·기변·돌변
    CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
    2013年 1期 44-47,52 ,共5页

    刘建军%蒋英芝%叶金波%李杰%杨细飞%周丽%黄海燕%黄新凤

    류건군%장영지%협금파%리걸%양세비%주려%황해연%황신봉

    SET%RNA干扰%慢病毒%载体 SET%RNA榦擾%慢病毒%載體
    SET%RNA간우%만병독%재체
    目的:构建SET基因shRNA慢病毒表达载体,为研究SET在三氯乙烯毒性机制中的作用提供技术支持.方法:通过NCBI检索SET序列,设计合成5对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体pLVX-shRNA1 vector.挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒.将质粒共转染到293T细胞,收集病毒上清,转导入L-02肝细胞中,利用嘌呤霉素筛选得到SET缺陷型细胞,最后利用荧光定量PCR和Western blot鉴定干扰效果.结果:PCR和测序结果证明双链shRNA正确插入慢病毒载体pLVX-shRNA1vector,共转染293T细胞得到高滴度病毒,转导L-02细胞筛选出SET基因缺陷型细胞.结论:利用慢病毒介导的RNAi技术成功构建了SET基因缺陷型细胞.
    목적:구건SET기인shRNA만병독표체재체,위연구SET재삼록을희독성궤제중적작용제공기술지지.방법:통과NCBI검색SET서렬,설계합성5대shRNA편단,퇴화후련접도만병독재체pLVX-shRNA1 vector.도취사선적단균락,경PCR화측서감정후제취질립.장질립공전염도293T세포,수집병독상청,전도입L-02간세포중,이용표령매소사선득도SET결함형세포,최후이용형광정량PCR화Western blot감정간우효과.결과:PCR화측서결과증명쌍련shRNA정학삽입만병독재체pLVX-shRNA1vector,공전염293T세포득도고적도병독,전도L-02세포사선출SET기인결함형세포.결론:이용만병독개도적RNAi기술성공구건료SET기인결함형세포.
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