癌变·畸变·突变
癌變·畸變·突變
암변·기변·돌변
CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
2013年
1期
7-12,17
,共7页
毛侃琅%徐新云%毛吉炎%袁建辉%刘国红%吴德生%杨细飞%周丽%黄新凤
毛侃瑯%徐新雲%毛吉炎%袁建輝%劉國紅%吳德生%楊細飛%週麗%黃新鳳
모간랑%서신운%모길염%원건휘%류국홍%오덕생%양세비%주려%황신봉
肝细胞%CYP1A2%慢病毒载体%三氯乙烯%凋亡基因%癌基因
肝細胞%CYP1A2%慢病毒載體%三氯乙烯%凋亡基因%癌基因
간세포%CYP1A2%만병독재체%삼록을희%조망기인%암기인
目的:构建CYP1A2基因高表达载体,转染到L02肝细胞,建立CYP1A2高表达细胞株并检测三氯乙烯对该细胞株凋亡基因和癌基因的影响.方法:根据GenBank提供的CYP1A2基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒高表达载体pLVX-acGFP1-C1中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞.用嘌呤霉素进行筛选得到CYP1A2高表达L02细胞株,通过荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定.用不同剂量三氯乙烯对正常L02肝细胞和CYP1A2高表达细胞进行染毒12h,采用PCR方法检测凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)mRNA表达的变化.结果:测序证明重组慢病毒高表达载体CYP1A2基因序列与GenBank提供的CYP1A2序列一致,荧光定量PCR检测显示CYP1A2高表达细胞株CYP1A2 mRNA表达比正常L02肝细胞提高317倍,Western blot结果显示CYP1A2高表达细胞株CYP1A2蛋白表达水平比正常L02肝细胞高3.41倍.三氯乙烯染毒后,CYP1A2高表达细胞中凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平与正常肝细胞无显著性差异(P＞0.05),而Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达水平高于正常肝细胞(P＜0.05或P＜0.01).CYP1A2高表达细胞中癌基因c-myc和p53 mRNA表达水平低于正常肝细胞(P＜0.05或P＜0.01),而c-fos和K-ras mRNA则高于正常肝细胞(P＜0.05或P＜0.01).结论:三氯乙烯对CYP1A2高表达细胞凋亡基因和癌基因表达有显著影响,提示CYP1A2是三氯乙烯在体内代谢的重要因素,与三氯乙烯毒性存在一定关系.
目的:構建CYP1A2基因高錶達載體,轉染到L02肝細胞,建立CYP1A2高錶達細胞株併檢測三氯乙烯對該細胞株凋亡基因和癌基因的影響.方法:根據GenBank提供的CYP1A2基因cDNA序列設計引物,PCR擴增該基因併將其剋隆到慢病毒高錶達載體pLVX-acGFP1-C1中,將已經構建的慢病毒載體對293FT細胞進行轉染,收集病毒上清,感染正常L02肝細胞.用嘌呤黴素進行篩選得到CYP1A2高錶達L02細胞株,通過熒光定量PCR和Western blot對細胞株進行鑒定.用不同劑量三氯乙烯對正常L02肝細胞和CYP1A2高錶達細胞進行染毒12h,採用PCR方法檢測凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)mRNA錶達的變化.結果:測序證明重組慢病毒高錶達載體CYP1A2基因序列與GenBank提供的CYP1A2序列一緻,熒光定量PCR檢測顯示CYP1A2高錶達細胞株CYP1A2 mRNA錶達比正常L02肝細胞提高317倍,Western blot結果顯示CYP1A2高錶達細胞株CYP1A2蛋白錶達水平比正常L02肝細胞高3.41倍.三氯乙烯染毒後,CYP1A2高錶達細胞中凋亡基因Bcl-2 mRNA錶達水平與正常肝細胞無顯著性差異(P＞0.05),而Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA錶達水平高于正常肝細胞(P＜0.05或P＜0.01).CYP1A2高錶達細胞中癌基因c-myc和p53 mRNA錶達水平低于正常肝細胞(P＜0.05或P＜0.01),而c-fos和K-ras mRNA則高于正常肝細胞(P＜0.05或P＜0.01).結論:三氯乙烯對CYP1A2高錶達細胞凋亡基因和癌基因錶達有顯著影響,提示CYP1A2是三氯乙烯在體內代謝的重要因素,與三氯乙烯毒性存在一定關繫.
목적:구건CYP1A2기인고표체재체,전염도L02간세포,건립CYP1A2고표체세포주병검측삼록을희대해세포주조망기인화암기인적영향.방법:근거GenBank제공적CYP1A2기인cDNA서렬설계인물,PCR확증해기인병장기극륭도만병독고표체재체pLVX-acGFP1-C1중,장이경구건적만병독재체대293FT세포진행전염,수집병독상청,감염정상L02간세포.용표령매소진행사선득도CYP1A2고표체L02세포주,통과형광정량PCR화Western blot대세포주진행감정.용불동제량삼록을희대정상L02간세포화CYP1A2고표체세포진행염독12h,채용PCR방법검측조망기인(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)화암기인(c-fos、c-myc、K-ras、p53)mRNA표체적변화.결과:측서증명중조만병독고표체재체CYP1A2기인서렬여GenBank제공적CYP1A2서렬일치,형광정량PCR검측현시CYP1A2고표체세포주CYP1A2 mRNA표체비정상L02간세포제고317배,Western blot결과현시CYP1A2고표체세포주CYP1A2단백표체수평비정상L02간세포고3.41배.삼록을희염독후,CYP1A2고표체세포중조망기인Bcl-2 mRNA표체수평여정상간세포무현저성차이(P＞0.05),이Caspase-3、Caspase-8화Caspase-9 mRNA표체수평고우정상간세포(P＜0.05혹P＜0.01).CYP1A2고표체세포중암기인c-myc화p53 mRNA표체수평저우정상간세포(P＜0.05혹P＜0.01),이c-fos화K-ras mRNA칙고우정상간세포(P＜0.05혹P＜0.01).결론:삼록을희대CYP1A2고표체세포조망기인화암기인표체유현저영향,제시CYP1A2시삼록을희재체내대사적중요인소,여삼록을희독성존재일정관계.
