标记免疫分析与临床
標記免疫分析與臨床
표기면역분석여림상
LABELED IMMUNOASSAYS AND CLINICAL MEDICINE
2013年
1期
25-30
,共6页
常艳%杨文%于晓红%潘静坤%田磊%薛毅珑
常豔%楊文%于曉紅%潘靜坤%田磊%薛毅瓏
상염%양문%우효홍%반정곤%전뢰%설의롱
骨形态发生蛋白%神经干细胞%诱导%胆碱能
骨形態髮生蛋白%神經榦細胞%誘導%膽堿能
골형태발생단백%신경간세포%유도%담감능
目的 了解骨形态发生蛋白4 (BMP4)是否具有诱导成年大鼠脑神经干细胞(NSCs)向胆碱能细胞分化的效应.方法 将从两月龄大鼠脑海马、纹状体等区域分离的细胞培养于含EGF、bFGF的DMEM/F12培养液中,在光镜下观察细胞的形态特征,并行Nestin细胞化学染色,24h后换成含有BMP4的培养液,培养8d时,行ChAT间接免疫荧光染色,在光镜下观察细胞形态的变化,并行FITC标记的流式细胞术检测NSCs分化.以脑立体定位术给成年大鼠右侧海马齿状回内注射BMP4或生理盐水0.5μL；14d后取大鼠脑组织切片,行ChAT免疫组织化学染色；以图像分析仪测量ChAT阳性细胞总面积.结果 分离出的大鼠脑海马、纹状体等区的细胞约48％为Nestin阳性的NSCs.培养8d时,光镜下见加BMP4组约34％的细胞呈神经元形态特征；间接免疫荧光染色见呈较强绿色荧光的ChAT阳性细胞较多；FITC标记流式细胞术检测到16％的细胞呈ChAT阳性.而未加BMP4组呈ChAT阳性的细胞约7％,明显少于加BMP4组,且荧光较弱.给大鼠海马齿状回区脑组织中注射BMP4后14d时,可见该区细胞出现较高的胆碱能表达.结论 BMP4可在体外培养及体内注射条件下诱导大鼠脑神经干细胞向胆碱能细胞分化.
目的 瞭解骨形態髮生蛋白4 (BMP4)是否具有誘導成年大鼠腦神經榦細胞(NSCs)嚮膽堿能細胞分化的效應.方法 將從兩月齡大鼠腦海馬、紋狀體等區域分離的細胞培養于含EGF、bFGF的DMEM/F12培養液中,在光鏡下觀察細胞的形態特徵,併行Nestin細胞化學染色,24h後換成含有BMP4的培養液,培養8d時,行ChAT間接免疫熒光染色,在光鏡下觀察細胞形態的變化,併行FITC標記的流式細胞術檢測NSCs分化.以腦立體定位術給成年大鼠右側海馬齒狀迴內註射BMP4或生理鹽水0.5μL；14d後取大鼠腦組織切片,行ChAT免疫組織化學染色；以圖像分析儀測量ChAT暘性細胞總麵積.結果 分離齣的大鼠腦海馬、紋狀體等區的細胞約48％為Nestin暘性的NSCs.培養8d時,光鏡下見加BMP4組約34％的細胞呈神經元形態特徵；間接免疫熒光染色見呈較彊綠色熒光的ChAT暘性細胞較多；FITC標記流式細胞術檢測到16％的細胞呈ChAT暘性.而未加BMP4組呈ChAT暘性的細胞約7％,明顯少于加BMP4組,且熒光較弱.給大鼠海馬齒狀迴區腦組織中註射BMP4後14d時,可見該區細胞齣現較高的膽堿能錶達.結論 BMP4可在體外培養及體內註射條件下誘導大鼠腦神經榦細胞嚮膽堿能細胞分化.
목적 료해골형태발생단백4 (BMP4)시부구유유도성년대서뇌신경간세포(NSCs)향담감능세포분화적효응.방법 장종량월령대서뇌해마、문상체등구역분리적세포배양우함EGF、bFGF적DMEM/F12배양액중,재광경하관찰세포적형태특정,병행Nestin세포화학염색,24h후환성함유BMP4적배양액,배양8d시,행ChAT간접면역형광염색,재광경하관찰세포형태적변화,병행FITC표기적류식세포술검측NSCs분화.이뇌입체정위술급성년대서우측해마치상회내주사BMP4혹생리염수0.5μL；14d후취대서뇌조직절편,행ChAT면역조직화학염색；이도상분석의측량ChAT양성세포총면적.결과 분리출적대서뇌해마、문상체등구적세포약48％위Nestin양성적NSCs.배양8d시,광경하견가BMP4조약34％적세포정신경원형태특정；간접면역형광염색견정교강록색형광적ChAT양성세포교다；FITC표기류식세포술검측도16％적세포정ChAT양성.이미가BMP4조정ChAT양성적세포약7％,명현소우가BMP4조,차형광교약.급대서해마치상회구뇌조직중주사BMP4후14d시,가견해구세포출현교고적담감능표체.결론 BMP4가재체외배양급체내주사조건하유도대서뇌신경간세포향담감능세포분화.
