CAJ | 학술논문

为了建立特异、敏感、快速检测兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以Bb的毒力因子CyaA为目的基因设计特异性引物和探针,并将PCR扩增产物克隆测序,测序结果与GenBank上Bb的CyaA的同源性达100％.以阳性克隆质粒作为定量检测标准品建立标准曲线,以提取的Bb基因组DNA为模板,进行特异性、灵敏度和重复性实验.该方法对波氏杆菌基因组DNA检测最低限为0.32 pg,灵敏度是普通PCR的25倍,与临床常见细菌无交叉反应.对45份疑似感染兔波氏杆菌病料的检测表明,TaqMan荧光定量PCR和普通PCR检测阳性率分别为75.6％和66.7％,两者符合率88.2％.结果表明,建立的TaqMan荧光定量Bb检测方法具有较好的特异性、敏感性和重复性.该方法的建立对Bb的临床高效诊断,Bb的防控提供了有效手段.
위료건립특이、민감、쾌속검측토지기관패혈파씨간균(Bordetella bronchiseptica,Bb)적TaqMan형광정량PCR방법,본연구이Bb적독력인자CyaA위목적기인설계특이성인물화탐침,병장PCR확증산물극륭측서,측서결과여GenBank상Bb적CyaA적동원성체100％.이양성극륭질립작위정량검측표준품건립표준곡선,이제취적Bb기인조DNA위모판,진행특이성、령민도화중복성실험.해방법대파씨간균기인조DNA검측최저한위0.32 pg,령민도시보통PCR적25배,여림상상견세균무교차반응.대45빈의사감염토파씨간균병료적검측표명,TaqMan형광정량PCR화보통PCR검측양성솔분별위75.6％화66.7％,량자부합솔88.2％.결과표명,건립적TaqMan형광정량Bb검측방법구유교호적특이성、민감성화중복성.해방법적건립대Bb적림상고효진단,Bb적방공제공료유효수단.