CAJ | 학술논문

硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)是脂肪酸合成过程中的一个主要限速酶,为了研究奶牛脂肪合成的基因调控机制,本研究首先从奶牛组织中克隆得到4个不同长度的SCD基因启动子片段(分别为212、380、416和760 bp),采用生物信息学的方法分析了启动子上不同的转录因子结合位点,将克隆片段与pGL3-basic荧光素酶报告基因载体进行KpnⅠ和Xho Ⅰ双酶切,连接形成重组启动子载体pGL3-SCD1、pGL3-SCD2、pGL3-SCD3和pGL3-SCD4.将载体纯化后,瞬时转染到HepG2细胞,对细胞施加胰岛素(10 IU/mL)和亚油酸(120 μm)处理,通过双荧光素酶报告基因检测启动子荧光素酶相对活性,结果发现,在SCD启动子序列上存在Sterol-regulated element(SRE)转录因子的结合位点,随着SCD启动子片段长度的延长,启动子活性也显著提高,pGL3-SCD4具有最高的启动子活性.与对照组相比,pGL3-SCD1～4启动子的活性在胰岛素刺激下都显著增强(P＜0.05),其中pGL3-SCD4的启动子的相对活性最高,达到了46.93.在亚油酸刺激下,pGL3-SCD 1～3的启动子活性没有显著变化,而pGL3-SCD4的活性显著减弱(P＜0.05),研究表明pGL3-SCD4启动子上增加的片段(-398～-742)可能对于SCD基因的表达调控具有重要作用.
경지선보매A거포화매(SCD)시지방산합성과정중적일개주요한속매,위료연구내우지방합성적기인조공궤제,본연구수선종내우조직중극륭득도4개불동장도적SCD기인계동자편단(분별위212、380、416화760 bp),채용생물신식학적방법분석료계동자상불동적전록인자결합위점,장극륭편단여pGL3-basic형광소매보고기인재체진행KpnⅠ화Xho Ⅰ쌍매절,련접형성중조계동자재체pGL3-SCD1、pGL3-SCD2、pGL3-SCD3화pGL3-SCD4.장재체순화후,순시전염도HepG2세포,대세포시가이도소(10 IU/mL)화아유산(120 μm)처리,통과쌍형광소매보고기인검측계동자형광소매상대활성,결과발현,재SCD계동자서렬상존재Sterol-regulated element(SRE)전록인자적결합위점,수착SCD계동자편단장도적연장,계동자활성야현저제고,pGL3-SCD4구유최고적계동자활성.여대조조상비,pGL3-SCD1～4계동자적활성재이도소자격하도현저증강(P＜0.05),기중pGL3-SCD4적계동자적상대활성최고,체도료46.93.재아유산자격하,pGL3-SCD 1～3적계동자활성몰유현저변화,이pGL3-SCD4적활성현저감약(P＜0.05),연구표명pGL3-SCD4계동자상증가적편단(-398～-742)가능대우SCD기인적표체조공구유중요작용.