广西植物
廣西植物
엄서식물
GUIHAIA
2012年
5期
593-598
,共6页
华顶杜鹃%ISSR%优化%亲缘关系
華頂杜鵑%ISSR%優化%親緣關繫
화정두견%ISSR%우화%친연관계
以华顶杜鹃为材料,利用单因素试验确立适合华顶杜鹃ISSR-PCR的优化反应体系:在25 μL反应体系中,Mg2+ 1.5或2.0 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,引物0.40 μmol/L,Taq DNA聚合酶tU,模板DNA 40 ng；分析ISSR-PCR反应体系中Mg2+、dNTP、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶浓度及退火温度对ISSR-PCR反应的影响.PCR扩增程序:预变性94℃3 min；变性94℃ 45 s；退火(Tm+2)℃(根据引物不同设定)75 s；延伸72℃ 1.5 min;40个循环；继续延伸72℃ 10 min;1.5%琼脂糖电泳分离PCR产物.并以优化好的体系初步分析华顶杜鹃及5个近缘种(茶绒杜鹃、Rhododendron mayebrae、Rh.sataense、南平杜鹃和映山红)的亲缘关系,6个种明显地聚为2大类:A类含有映山红、南平杜鹃；B类含有茶绒杜鹃、Rh.sataense、Rh.mayebrae与华顶杜鹃,为明确华顶杜鹃的系统地位提供可借鉴的依据.
以華頂杜鵑為材料,利用單因素試驗確立適閤華頂杜鵑ISSR-PCR的優化反應體繫:在25 μL反應體繫中,Mg2+ 1.5或2.0 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,引物0.40 μmol/L,Taq DNA聚閤酶tU,模闆DNA 40 ng；分析ISSR-PCR反應體繫中Mg2+、dNTP、引物、模闆DNA、Taq DNA聚閤酶濃度及退火溫度對ISSR-PCR反應的影響.PCR擴增程序:預變性94℃3 min；變性94℃ 45 s；退火(Tm+2)℃(根據引物不同設定)75 s；延伸72℃ 1.5 min;40箇循環；繼續延伸72℃ 10 min;1.5%瓊脂糖電泳分離PCR產物.併以優化好的體繫初步分析華頂杜鵑及5箇近緣種(茶絨杜鵑、Rhododendron mayebrae、Rh.sataense、南平杜鵑和映山紅)的親緣關繫,6箇種明顯地聚為2大類:A類含有映山紅、南平杜鵑；B類含有茶絨杜鵑、Rh.sataense、Rh.mayebrae與華頂杜鵑,為明確華頂杜鵑的繫統地位提供可藉鑒的依據.
이화정두견위재료,이용단인소시험학립괄합화정두견ISSR-PCR적우화반응체계:재25 μL반응체계중,Mg2+ 1.5혹2.0 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,인물0.40 μmol/L,Taq DNA취합매tU,모판DNA 40 ng；분석ISSR-PCR반응체계중Mg2+、dNTP、인물、모판DNA、Taq DNA취합매농도급퇴화온도대ISSR-PCR반응적영향.PCR확증정서:예변성94℃3 min；변성94℃ 45 s；퇴화(Tm+2)℃(근거인물불동설정)75 s；연신72℃ 1.5 min;40개순배；계속연신72℃ 10 min;1.5%경지당전영분리PCR산물.병이우화호적체계초보분석화정두견급5개근연충(다융두견、Rhododendron mayebrae、Rh.sataense、남평두견화영산홍)적친연관계,6개충명현지취위2대류:A류함유영산홍、남평두견；B류함유다융두견、Rh.sataense、Rh.mayebrae여화정두견,위명학화정두견적계통지위제공가차감적의거.
