石河子大学学报（自然科学版）
石河子大學學報（自然科學版）
석하자대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHIHEZI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2012年
6期
689-694
,共6页
田桂英%乔亚红%向本春%郑银英%李诗林%崔百明
田桂英%喬亞紅%嚮本春%鄭銀英%李詩林%崔百明
전계영%교아홍%향본춘%정은영%리시림%최백명
CMV%ToMV%RNAi载体%转基因烟草
CMV%ToMV%RNAi載體%轉基因煙草
CMV%ToMV%RNAi재체%전기인연초
为了获得抗CMV和ToMV的转基因烟草,本试验采用RT-PCR的方法从新疆加工番茄CMV分离物NS0-4 克隆了1a复制酶第71～360 bp和第1801～2050 bp序列作为干扰片段CR9和CR14,以及从ToMV分离物SCS-4 克隆了130/180 kDa复制酶第658～940 bp和第2551～2850 bp序列作为干扰片段To9和To14.通过T克隆载体将CR9和To9及CR14和To14进行拼接,分别构建成含反向重复结构拼接片段的RNAi表达载体pBi35STC9和pBi35STC14;利用农杆菌介导法分别将表达载体侵染本氏烟(Nicotiana benthamiana),再生植株经分子检测,结果显示已成功获得了转pBi35STC9烟草9个单株及转pBi35STC14烟草8个单株,为进一步的攻毒试验奠定了基础.
為瞭穫得抗CMV和ToMV的轉基因煙草,本試驗採用RT-PCR的方法從新疆加工番茄CMV分離物NS0-4 剋隆瞭1a複製酶第71～360 bp和第1801～2050 bp序列作為榦擾片段CR9和CR14,以及從ToMV分離物SCS-4 剋隆瞭130/180 kDa複製酶第658～940 bp和第2551～2850 bp序列作為榦擾片段To9和To14.通過T剋隆載體將CR9和To9及CR14和To14進行拼接,分彆構建成含反嚮重複結構拼接片段的RNAi錶達載體pBi35STC9和pBi35STC14;利用農桿菌介導法分彆將錶達載體侵染本氏煙(Nicotiana benthamiana),再生植株經分子檢測,結果顯示已成功穫得瞭轉pBi35STC9煙草9箇單株及轉pBi35STC14煙草8箇單株,為進一步的攻毒試驗奠定瞭基礎.
위료획득항CMV화ToMV적전기인연초,본시험채용RT-PCR적방법종신강가공번가CMV분리물NS0-4 극륭료1a복제매제71～360 bp화제1801～2050 bp서렬작위간우편단CR9화CR14,이급종ToMV분리물SCS-4 극륭료130/180 kDa복제매제658～940 bp화제2551～2850 bp서렬작위간우편단To9화To14.통과T극륭재체장CR9화To9급CR14화To14진행병접,분별구건성함반향중복결구병접편단적RNAi표체재체pBi35STC9화pBi35STC14;이용농간균개도법분별장표체재체침염본씨연(Nicotiana benthamiana),재생식주경분자검측,결과현시이성공획득료전pBi35STC9연초9개단주급전pBi35STC14연초8개단주,위진일보적공독시험전정료기출.
