华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2012年
6期
43-47
,共5页
高丛丛%姚婷婷%周杰%朱树华
高叢叢%姚婷婷%週傑%硃樹華
고총총%요정정%주걸%주수화
肥城桃%乙烯受体%ETR1%基因克隆%重组蛋白
肥城桃%乙烯受體%ETR1%基因剋隆%重組蛋白
비성도%을희수체%ETR1%기인극륭%중조단백
克隆与肥城桃成熟有关的乙烯受体ETR1基因片段,优化ETR1的表达条件,获得ETR1重组蛋白,为进一步研究ETR1功能并改善肥城桃贮运性能奠定基础.以肥城桃成熟果实总RNA反转录cDNA为模板,经PCR扩增得到特异片段,将该片段连接到质粒,经双酶切后,连接至质粒并转染至表达载体,IPTG诱导,优化表达条件.并以cDNA为模板,进行实时荧光定量PCR,测定外源NO对ETR1相对表达量的影响.序列分析结果表明,该序列与Gen-Bank中的AF124527的cDNA序列同源性为99％,氨基酸序列同源性为99％.优化蛋白表达条件为:IPTG最佳浓度为0.5 mmol/L,最适温度为30℃,最适诱导时间为8h.经优化后,ETR1重组蛋白成功表达,为TETR1的重组生产和对ETR1功能的体外研究提供了条件.此外,外源NO对体外表达的ETR1基因有抑制作用.
剋隆與肥城桃成熟有關的乙烯受體ETR1基因片段,優化ETR1的錶達條件,穫得ETR1重組蛋白,為進一步研究ETR1功能併改善肥城桃貯運性能奠定基礎.以肥城桃成熟果實總RNA反轉錄cDNA為模闆,經PCR擴增得到特異片段,將該片段連接到質粒,經雙酶切後,連接至質粒併轉染至錶達載體,IPTG誘導,優化錶達條件.併以cDNA為模闆,進行實時熒光定量PCR,測定外源NO對ETR1相對錶達量的影響.序列分析結果錶明,該序列與Gen-Bank中的AF124527的cDNA序列同源性為99％,氨基痠序列同源性為99％.優化蛋白錶達條件為:IPTG最佳濃度為0.5 mmol/L,最適溫度為30℃,最適誘導時間為8h.經優化後,ETR1重組蛋白成功錶達,為TETR1的重組生產和對ETR1功能的體外研究提供瞭條件.此外,外源NO對體外錶達的ETR1基因有抑製作用.
극륭여비성도성숙유관적을희수체ETR1기인편단,우화ETR1적표체조건,획득ETR1중조단백,위진일보연구ETR1공능병개선비성도저운성능전정기출.이비성도성숙과실총RNA반전록cDNA위모판,경PCR확증득도특이편단,장해편단련접도질립,경쌍매절후,련접지질립병전염지표체재체,IPTG유도,우화표체조건.병이cDNA위모판,진행실시형광정량PCR,측정외원NO대ETR1상대표체량적영향.서렬분석결과표명,해서렬여Gen-Bank중적AF124527적cDNA서렬동원성위99％,안기산서렬동원성위99％.우화단백표체조건위:IPTG최가농도위0.5 mmol/L,최괄온도위30℃,최괄유도시간위8h.경우화후,ETR1중조단백성공표체,위TETR1적중조생산화대ETR1공능적체외연구제공료조건.차외,외원NO대체외표체적ETR1기인유억제작용.
