CAJ | 학술논문

采用两种硫酸铵饱和梯度盐析方法对怀头鲇Silurus soldatovi胃黏膜蛋白酶激活液进行粗提,用6种组合层析条件对胃蛋白酶粗提液进行Sephadex G-75凝胶过滤层析,获得初步纯化的蛋白酶,并通过蛋白质浓度、蛋白酶活力及SDS-PAGE凝胶电泳对其分析鉴定.结果表明:在28％、56％、83％ (NH4)2SO4饱和度条件下分级盐析效果比较理想;不同层析条件下层析峰分离液的蛋白酶活力测定均显示出酶活性,层析峰蛋白酶比活力较粗提液提高5～9倍,60 cm柱(层析柱高52 cm、直径1.6 cm)层析峰分离效果较好.从盐析粗提液电泳结果,以及在60 cm层析柱、pH为3.3的0.01 mol/L β-丙氨酸-甲酸缓冲液、0.8mL/min流速条件下的层析峰蛋白分管收集液酶活力峰值和层析峰峰顶形状判断,怀头鲇胃蛋白酶可能有两种蛋白组分存在,并测得相对分子质量为26 000 ～47 000.
채용량충류산안포화제도염석방법대부두점Silurus soldatovi위점막단백매격활액진행조제,용6충조합층석조건대위단백매조제액진행Sephadex G-75응효과려층석,획득초보순화적단백매,병통과단백질농도、단백매활력급SDS-PAGE응효전영대기분석감정.결과표명:재28％、56％、83％ (NH4)2SO4포화도조건하분급염석효과비교이상;불동층석조건하층석봉분리액적단백매활력측정균현시출매활성,층석봉단백매비활력교조제액제고5～9배,60 cm주(층석주고52 cm、직경1.6 cm)층석봉분리효과교호.종염석조제액전영결과,이급재60 cm층석주、pH위3.3적0.01 mol/L β-병안산-갑산완충액、0.8mL/min류속조건하적층석봉단백분관수집액매활력봉치화층석봉봉정형상판단,부두점위단백매가능유량충단백조분존재,병측득상대분자질량위26 000 ～47 000.