大连海洋大学学报
大連海洋大學學報
대련해양대학학보
JOURNAL OF DALIAN FISHERIES UNIVERSITY
2012年
6期
508-512
,共5页
方珍珍%景宏丽%江育林%张利峰%张旻%李华
方珍珍%景宏麗%江育林%張利峰%張旻%李華
방진진%경굉려%강육림%장리봉%장민%리화
草鱼呼肠孤病毒%衣壳蛋白%原核表达
草魚呼腸孤病毒%衣殼蛋白%原覈錶達
초어호장고병독%의각단백%원핵표체
从草鱼Ctenopharyngodon idellus出血病病原——草鱼呼肠孤病毒GCRV-873株扩增病毒的外壳蛋白(GCRV-VP5)基因,并将GCRV-VP5基因克隆到原核表达载体pET-30α,转化至大肠杆菌E.coli BL-21(DE3)中后,用IPTG诱导培养,获得带有重组质粒菌体的总蛋白.用GCRV-873毒株免疫山羊得到的抗血清作为一抗进行免疫印迹试验,结果在硝酸纤维素膜上检测到在相对分子质量为77 000处有特异性免疫条带,与预测的GCRV-873 VP5蛋白一致,提示大肠杆菌融合表达草鱼出血病病毒的VP5蛋白.表达的融合蛋白主要以不可溶的包涵体形式存在,经柱层析纯化后蛋白纯度可达90％.本试验中获得的融合蛋白可为后期免疫动物提供了抗原,也为建立GCRV免疫学检测方法提供了依据.
從草魚Ctenopharyngodon idellus齣血病病原——草魚呼腸孤病毒GCRV-873株擴增病毒的外殼蛋白(GCRV-VP5)基因,併將GCRV-VP5基因剋隆到原覈錶達載體pET-30α,轉化至大腸桿菌E.coli BL-21(DE3)中後,用IPTG誘導培養,穫得帶有重組質粒菌體的總蛋白.用GCRV-873毒株免疫山羊得到的抗血清作為一抗進行免疫印跡試驗,結果在硝痠纖維素膜上檢測到在相對分子質量為77 000處有特異性免疫條帶,與預測的GCRV-873 VP5蛋白一緻,提示大腸桿菌融閤錶達草魚齣血病病毒的VP5蛋白.錶達的融閤蛋白主要以不可溶的包涵體形式存在,經柱層析純化後蛋白純度可達90％.本試驗中穫得的融閤蛋白可為後期免疫動物提供瞭抗原,也為建立GCRV免疫學檢測方法提供瞭依據.
종초어Ctenopharyngodon idellus출혈병병원——초어호장고병독GCRV-873주확증병독적외각단백(GCRV-VP5)기인,병장GCRV-VP5기인극륭도원핵표체재체pET-30α,전화지대장간균E.coli BL-21(DE3)중후,용IPTG유도배양,획득대유중조질립균체적총단백.용GCRV-873독주면역산양득도적항혈청작위일항진행면역인적시험,결과재초산섬유소막상검측도재상대분자질량위77 000처유특이성면역조대,여예측적GCRV-873 VP5단백일치,제시대장간균융합표체초어출혈병병독적VP5단백.표체적융합단백주요이불가용적포함체형식존재,경주층석순화후단백순도가체90％.본시험중획득적융합단백가위후기면역동물제공료항원,야위건립GCRV면역학검측방법제공료의거.
