CAJ | 학술논문

本研究目的是通过基因克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得水稻(Oryza sativa subs.japonica)、菠菜(Spinacia oleracea)甜菜碱醛脱氢酶基因(OsBA DH和SpBADH)的融合蛋白,体外测定两者的醛脱氢酶活性,说明水稻存在OsBADH且具有醛脱氢酶功能.通过RT-PCR成功克隆了OsBADH和SpBADH基因的全长序列,二者氨基酸序列同源性为70.8％.OsBADH和SpBADH的重组质粒均可在大肠杆菌(Escherichia coli)菌株BL21(DE3)中表达,SDS-PAGE分析表明,经0.4 mmol/L IPTG诱导的融合蛋白条带约70 kD.两者的表达产物经TALON金属螯合树脂纯化后进行酶活测定,结果显示都具有甜菜碱醛脱氢酶活性.OsBADH的比活力为74.87 nmol/min/mg,对照SpBADH比活力为86.84 nmol/min/mg,表明OsBADH能够有效行使醛脱氢酶功能,而高效液相色谱法未在水稻叶片中检测出甜菜碱.研究结果提示,水稻可能并非由于BADH自身不具有酶活而不积累甘氨酸甜菜碱,该研究为进一步探讨水稻中甜菜碱合成的分子机制提供了研究基础.
본연구목적시통과기인극륭、원핵표체화단백순화기술획득수도(Oryza sativa subs.japonica)、파채(Spinacia oleracea)첨채감철탈경매기인(OsBA DH화SpBADH)적융합단백,체외측정량자적철탈경매활성,설명수도존재OsBADH차구유철탈경매공능.통과RT-PCR성공극륭료OsBADH화SpBADH기인적전장서렬,이자안기산서렬동원성위70.8％.OsBADH화SpBADH적중조질립균가재대장간균(Escherichia coli)균주BL21(DE3)중표체,SDS-PAGE분석표명,경0.4 mmol/L IPTG유도적융합단백조대약70 kD.량자적표체산물경TALON금속오합수지순화후진행매활측정,결과현시도구유첨채감철탈경매활성.OsBADH적비활력위74.87 nmol/min/mg,대조SpBADH비활력위86.84 nmol/min/mg,표명OsBADH능구유효행사철탈경매공능,이고효액상색보법미재수도협편중검측출첨채감.연구결과제시,수도가능병비유우BADH자신불구유매활이불적루감안산첨채감,해연구위진일보탐토수도중첨채감합성적분자궤제제공료연구기출.