生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
12期
93-100
,共8页
于国红%马雪峰%徐娜%辛世超%程宪国
于國紅%馬雪峰%徐娜%辛世超%程憲國
우국홍%마설봉%서나%신세초%정헌국
VIGS%番茄%DREB%干旱胁迫%Real-time qPCR
VIGS%番茄%DREB%榦旱脅迫%Real-time qPCR
VIGS%번가%DREB%간한협박%Real-time qPCR
SlDREB2基因是利用rd29A基因启动子的DRE元件通过酵母单杂交技术从番茄幼苗(丽春)cDNA文库中筛选得到的属于EREBP家族的一个转录因子基因.利用构建病毒VIGS载体,分别用含pBINTRB6、pTV00::SlDREB2-1和pTV00::SlDREB2-2重组载体的农杆菌GV3101菌液灌根与叶片注射法侵染番茄植株,转化7d后进行病毒DNA检测与验证.测定了干旱胁迫下侵染成功的番茄植株与野生型株系的生理指标,并通过Real-time qPCR分析了VIGS介导的SlDREB2转录因子基因的表达特征.番茄植株干旱3周胁迫处理后测定结果表明,野生番茄中脯氨酸和可溶性糖水平要高于被VIGS病毒侵染的番茄植株,而丙二醛水平要低于被侵染植株,并且指标显示被pTV00::SlDREB2-2重组载体的农杆菌GV3101菌液侵染的番茄植株抗旱性明显降低；复水1周后,受VIGS浸染株系丙二醛含量明显高于野生型,而可溶性糖与脯氨酸累积却低于野生型.Real-time qPCR结果表明,经VIGS病毒侵染过的番茄植株在胁迫处理时期SlDREB2基因的相对表达量都明显低于野生型株系,表明番茄SlDREB2基因保守域末端459 bp的特异片段具有较显著的沉默效果,说明VIGS介导的SlDREB2基因的表达受干旱诱导,该基因可以作为抗旱型作物品种改良的有价值基因.
SlDREB2基因是利用rd29A基因啟動子的DRE元件通過酵母單雜交技術從番茄幼苗(麗春)cDNA文庫中篩選得到的屬于EREBP傢族的一箇轉錄因子基因.利用構建病毒VIGS載體,分彆用含pBINTRB6、pTV00::SlDREB2-1和pTV00::SlDREB2-2重組載體的農桿菌GV3101菌液灌根與葉片註射法侵染番茄植株,轉化7d後進行病毒DNA檢測與驗證.測定瞭榦旱脅迫下侵染成功的番茄植株與野生型株繫的生理指標,併通過Real-time qPCR分析瞭VIGS介導的SlDREB2轉錄因子基因的錶達特徵.番茄植株榦旱3週脅迫處理後測定結果錶明,野生番茄中脯氨痠和可溶性糖水平要高于被VIGS病毒侵染的番茄植株,而丙二醛水平要低于被侵染植株,併且指標顯示被pTV00::SlDREB2-2重組載體的農桿菌GV3101菌液侵染的番茄植株抗旱性明顯降低；複水1週後,受VIGS浸染株繫丙二醛含量明顯高于野生型,而可溶性糖與脯氨痠纍積卻低于野生型.Real-time qPCR結果錶明,經VIGS病毒侵染過的番茄植株在脅迫處理時期SlDREB2基因的相對錶達量都明顯低于野生型株繫,錶明番茄SlDREB2基因保守域末耑459 bp的特異片段具有較顯著的沉默效果,說明VIGS介導的SlDREB2基因的錶達受榦旱誘導,該基因可以作為抗旱型作物品種改良的有價值基因.
SlDREB2기인시이용rd29A기인계동자적DRE원건통과효모단잡교기술종번가유묘(려춘)cDNA문고중사선득도적속우EREBP가족적일개전록인자기인.이용구건병독VIGS재체,분별용함pBINTRB6、pTV00::SlDREB2-1화pTV00::SlDREB2-2중조재체적농간균GV3101균액관근여협편주사법침염번가식주,전화7d후진행병독DNA검측여험증.측정료간한협박하침염성공적번가식주여야생형주계적생리지표,병통과Real-time qPCR분석료VIGS개도적SlDREB2전록인자기인적표체특정.번가식주간한3주협박처리후측정결과표명,야생번가중포안산화가용성당수평요고우피VIGS병독침염적번가식주,이병이철수평요저우피침염식주,병차지표현시피pTV00::SlDREB2-2중조재체적농간균GV3101균액침염적번가식주항한성명현강저；복수1주후,수VIGS침염주계병이철함량명현고우야생형,이가용성당여포안산루적각저우야생형.Real-time qPCR결과표명,경VIGS병독침염과적번가식주재협박처리시기SlDREB2기인적상대표체량도명현저우야생형주계,표명번가SlDREB2기인보수역말단459 bp적특이편단구유교현저적침묵효과,설명VIGS개도적SlDREB2기인적표체수간한유도,해기인가이작위항한형작물품충개량적유개치기인.
