中华临床医师杂志（电子版）
中華臨床醫師雜誌（電子版）
중화림상의사잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CLINICIANS(ELECTRONIC VERSION)
2012年
18期
82-86
,共5页
吉晓滨%吕景礼%陈敬贤%刘启才%谢景华
吉曉濱%呂景禮%陳敬賢%劉啟纔%謝景華
길효빈%려경례%진경현%류계재%사경화
葡萄球菌类毒素%超抗原%喉肿瘤%真核载体%基因克隆%MAGE-A3
葡萄毬菌類毒素%超抗原%喉腫瘤%真覈載體%基因剋隆%MAGE-A3
포도구균류독소%초항원%후종류%진핵재체%기인극륭%MAGE-A3
Staphylococcal endotoxin%Superantigen%Laryngeal carcinoma%Eukaryotic vector%Gene cloning%MAGE-A3 genes
目的 构建超抗原SEA和喉癌来源的MAGE-A3基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达.方法 分别用RT-PCR方法及人工化学合成法获得MAGE-A3和SEA基因片段,然后依次将MAGE-A3和SEA基因克隆至含内部核糖体进入位点的真核表达载体IRES序列的上、下游,构建成重组质粒pMAGEA3-IRES-SEA.经脂质体转染至293T细胞以后,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别鉴定SEA、MAGE-A3基因的表达.结果 限制性内切酶酶切分析证实MAGE-A3基因和SEA基因均正确地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因测序结果与GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,实现了双基因的正确重组.重组质粒转染293T细胞后能检测到MAGE-A3、SEA基因的高水平表达.结论 成功地构建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作为抗喉癌DNA疫苗应用的基础.
目的 構建超抗原SEA和喉癌來源的MAGE-A3基因共錶達的真覈錶達載體,檢測、鑒定其在293T細胞中的錶達.方法 分彆用RT-PCR方法及人工化學閤成法穫得MAGE-A3和SEA基因片段,然後依次將MAGE-A3和SEA基因剋隆至含內部覈糖體進入位點的真覈錶達載體IRES序列的上、下遊,構建成重組質粒pMAGEA3-IRES-SEA.經脂質體轉染至293T細胞以後,用熒光定量PCR、蛋白免疫印跡分彆鑒定SEA、MAGE-A3基因的錶達.結果 限製性內切酶酶切分析證實MAGE-A3基因和SEA基因均正確地剋隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因測序結果與GenBank公佈的MAGE-A3、SEA序列完全一緻,實現瞭雙基因的正確重組.重組質粒轉染293T細胞後能檢測到MAGE-A3、SEA基因的高水平錶達.結論 成功地構建瞭pMAGEA3-IRES-SEA真覈錶達質粒,併能在293T細胞中有效錶達MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定瞭其作為抗喉癌DNA疫苗應用的基礎.
목적 구건초항원SEA화후암래원적MAGE-A3기인공표체적진핵표체재체,검측、감정기재293T세포중적표체.방법 분별용RT-PCR방법급인공화학합성법획득MAGE-A3화SEA기인편단,연후의차장MAGE-A3화SEA기인극륭지함내부핵당체진입위점적진핵표체재체IRES서렬적상、하유,구건성중조질립pMAGEA3-IRES-SEA.경지질체전염지293T세포이후,용형광정량PCR、단백면역인적분별감정SEA、MAGE-A3기인적표체.결과 한제성내절매매절분석증실MAGE-A3기인화SEA기인균정학지극륭재pMAGEA3-IRES-SEA중,기인측서결과여GenBank공포적MAGE-A3、SEA서렬완전일치,실현료쌍기인적정학중조.중조질립전염293T세포후능검측도MAGE-A3、SEA기인적고수평표체.결론 성공지구건료pMAGEA3-IRES-SEA진핵표체질립,병능재293T세포중유효표체MAGE-A3화SEA단백,유차전정료기작위항후암DNA역묘응용적기출.
