CAJ | 학술논문

本研究旨在为体细胞杂交法在花生育种中的应用奠定基础.将花生栽培种Krapts和野生种A.stenosperma幼叶解离的原生质体,用PEG方法融合后,置于添加2 mg/L毒莠定(Pic)、0.1 mg/L苯基噻二唑基脲(TDZ)、2％的椰乳、5g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和0.1％2-吗啉乙磺酸(MES)的改良MSB5(MS无机盐+B5有机成分)液体培养基中进行浅层培养.5周后将形成的小愈伤组织转移到添加3 mg/L玉米素(ZT)、0.2 mg/L 6-苄氨基嘌呤(BAP)、0.1 mg/L萘乙酸(NAA)的固体培养基上进行培养,促使愈伤组织增殖.观察发现,融合处理的原生质体在液体培养基上培养4天后开始分裂,2周后形成直径约300 μm的细胞团,5周后小愈伤组织直径可达2～3 mm.当将小愈伤组织转移到固体培养基上后,愈伤组织迅速增殖,并获得大量愈伤组织.提取愈伤组织DNA进行PCR检测,部分愈伤组织扩增出了双亲特异的DNA条带或双亲都不具有的新条带,说明愈伤组织来自于融合细胞.
본연구지재위체세포잡교법재화생육충중적응용전정기출.장화생재배충Krapts화야생충A.stenosperma유협해리적원생질체,용PEG방법융합후,치우첨가2 mg/L독유정(Pic)、0.1 mg/L분기새이서기뇨(TDZ)、2％적야유、5g/L취을희필각완동(PVP)화0.1％2-마람을광산(MES)적개량MSB5(MS무궤염+B5유궤성분)액체배양기중진행천층배양.5주후장형성적소유상조직전이도첨가3 mg/L옥미소(ZT)、0.2 mg/L 6-변안기표령(BAP)、0.1 mg/L내을산(NAA)적고체배양기상진행배양,촉사유상조직증식.관찰발현,융합처리적원생질체재액체배양기상배양4천후개시분렬,2주후형성직경약300 μm적세포단,5주후소유상조직직경가체2～3 mm.당장소유상조직전이도고체배양기상후,유상조직신속증식,병획득대량유상조직.제취유상조직DNA진행PCR검측,부분유상조직확증출료쌍친특이적DNA조대혹쌍친도불구유적신조대,설명유상조직래자우융합세포.