CAJ | 학술논문

通过磁珠富集法筛选扁吻鱼的微卫星分子标记.利用限制性内切酶Sau3AI对扁吻鱼的基因组DNA进行酶切,并选取片段大小在250 ～750 bp间的片段,利用PCR技术进行全基因组扩增,采用生物素标记的(CA)8探针对微卫星片段进行富集.富集后的片段与T载体连接后利用DH5α大肠杆菌进行转化,然后以Sau3AI为引物对菌落进行PCR扩增,扩增后选片段大小符合条件的菌落挑取至测序板,进行测序.结果表明:PCR筛选共获得563个阳性克隆,其中测序192个阳性克隆后发现有53个微卫星序列；序列分析表明,完美型占67.92％,非完美型为22.64％；混合性标记占9.43％.根据测序结果设计微卫星引物24对,经PCR扩增筛选,琼脂糖凝胶电泳结果显示,其中22对引物可扩增出清晰的条带,其中具有多态性的13对.利用13对多态性引物对扁吻鱼野生群体进行扩增,PCR扩增结果显示,等位基因数为3～6,多态信息含量(PIC)为0.625 3,12个位点处于高度多态水平(PIC ＞0.5).
통과자주부집법사선편문어적미위성분자표기.이용한제성내절매Sau3AI대편문어적기인조DNA진행매절,병선취편단대소재250 ～750 bp간적편단,이용PCR기술진행전기인조확증,채용생물소표기적(CA)8탐침대미위성편단진행부집.부집후적편단여T재체련접후이용DH5α대장간균진행전화,연후이Sau3AI위인물대균락진행PCR확증,확증후선편단대소부합조건적균락도취지측서판,진행측서.결과표명:PCR사선공획득563개양성극륭,기중측서192개양성극륭후발현유53개미위성서렬；서렬분석표명,완미형점67.92％,비완미형위22.64％；혼합성표기점9.43％.근거측서결과설계미위성인물24대,경PCR확증사선,경지당응효전영결과현시,기중22대인물가확증출청석적조대,기중구유다태성적13대.이용13대다태성인물대편문어야생군체진행확증,PCR확증결과현시,등위기인수위3～6,다태신식함량(PIC)위0.625 3,12개위점처우고도다태수평(PIC ＞0.5).