中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2013年
6期
1-7
,共7页
张改改%滕旭%刘越%吴扬%宁明%齐永芬%尹新华
張改改%滕旭%劉越%吳颺%寧明%齊永芬%尹新華
장개개%등욱%류월%오양%저명%제영분%윤신화
心脏%内质网应激%缺血/再灌注损伤%组织切片孵育%糖调节蛋白78
心髒%內質網應激%缺血/再灌註損傷%組織切片孵育%糖調節蛋白78
심장%내질망응격%결혈/재관주손상%조직절편부육%당조절단백78
Heart%Endoplasmic reticulum stress%Ischemia/reperfusion injury%Tissue slice incubation%Glucose-regulated protein 78
目的 探讨构建体外心肌内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型的方法及实验条件.方法 应用Langendorff灌流装置制作大鼠心脏离体缺血/再灌注模型,采用PowerLab系统持续监测血流动力学参数,Western blot检测缺血(停止灌流)不同时间/再灌注120 min后心肌ERS标志性分子糖调节蛋白(GRP) 78的表达,并检测C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测二者mRNA的表达;体外孵育心肌组织切片,分别应用不同浓度的衣霉素(tunicamycin,Tm)和二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)处理3h和6h,Westem-blot检测心肌GRP78及CHOP的表达.结果 与对照组相比,离体灌注心脏缺血40 min/再灌注120 min时,心肌GRP78表达最高(P＜0.01),CHOP蛋白、GRP78 mRNA及CHOP mRNA表达均明显升高(P ＜0.01,P＜0.05和P＜0.05),同时,各项血流动力学参数受损(均P＜0.01);Tm 10 μg/mL和DTT 2 mmol/L孵育心肌组织切片3h时,GRP78表达较对照组显著升高(均P＜0.001),CHOP表达亦均明显升高(P＜0.05和P＜0.01).结论 使用离体大鼠心脏缺血/再灌注和孵育心肌组织切片的方法,均可成功构建体外心肌ERS模型.
目的 探討構建體外心肌內質網應激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型的方法及實驗條件.方法 應用Langendorff灌流裝置製作大鼠心髒離體缺血/再灌註模型,採用PowerLab繫統持續鑑測血流動力學參數,Western blot檢測缺血(停止灌流)不同時間/再灌註120 min後心肌ERS標誌性分子糖調節蛋白(GRP) 78的錶達,併檢測C/EBP同源蛋白(CHOP)的錶達;逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測二者mRNA的錶達;體外孵育心肌組織切片,分彆應用不同濃度的衣黴素(tunicamycin,Tm)和二硫囌糖醇(dithiothreitol,DTT)處理3h和6h,Westem-blot檢測心肌GRP78及CHOP的錶達.結果 與對照組相比,離體灌註心髒缺血40 min/再灌註120 min時,心肌GRP78錶達最高(P＜0.01),CHOP蛋白、GRP78 mRNA及CHOP mRNA錶達均明顯升高(P ＜0.01,P＜0.05和P＜0.05),同時,各項血流動力學參數受損(均P＜0.01);Tm 10 μg/mL和DTT 2 mmol/L孵育心肌組織切片3h時,GRP78錶達較對照組顯著升高(均P＜0.001),CHOP錶達亦均明顯升高(P＜0.05和P＜0.01).結論 使用離體大鼠心髒缺血/再灌註和孵育心肌組織切片的方法,均可成功構建體外心肌ERS模型.
목적 탐토구건체외심기내질망응격(endoplasmic reticulum stress,ERS)모형적방법급실험조건.방법 응용Langendorff관류장치제작대서심장리체결혈/재관주모형,채용PowerLab계통지속감측혈류동역학삼수,Western blot검측결혈(정지관류)불동시간/재관주120 min후심기ERS표지성분자당조절단백(GRP) 78적표체,병검측C/EBP동원단백(CHOP)적표체;역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측이자mRNA적표체;체외부육심기조직절편,분별응용불동농도적의매소(tunicamycin,Tm)화이류소당순(dithiothreitol,DTT)처리3h화6h,Westem-blot검측심기GRP78급CHOP적표체.결과 여대조조상비,리체관주심장결혈40 min/재관주120 min시,심기GRP78표체최고(P＜0.01),CHOP단백、GRP78 mRNA급CHOP mRNA표체균명현승고(P ＜0.01,P＜0.05화P＜0.05),동시,각항혈류동역학삼수수손(균P＜0.01);Tm 10 μg/mL화DTT 2 mmol/L부육심기조직절편3h시,GRP78표체교대조조현저승고(균P＜0.001),CHOP표체역균명현승고(P＜0.05화P＜0.01).결론 사용리체대서심장결혈/재관주화부육심기조직절편적방법,균가성공구건체외심기ERS모형.
