科技通报
科技通報
과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2013年
1期
57-62
,共6页
马晓丽%朱丹华%李雁杰%杨清华%董德坤
馬曉麗%硃丹華%李雁傑%楊清華%董德坤
마효려%주단화%리안걸%양청화%동덕곤
GmPHD2%转录因子%植物表达载体%Bar%耐盐
GmPHD2%轉錄因子%植物錶達載體%Bar%耐鹽
GmPHD2%전록인자%식물표체재체%Bar%내염
利用高保真PCR酶从克隆载体pMD 18T-GmPHD2中扩增出大豆PHD类转录因子GmPHD2,并于基因上下游分别引入XbaI和XhoI酶切位点；然后通过TA克隆、载体双酶切、连接、转化等技术手段,将其连入植物表达载体pBA002,构建了含GmPHD2和抗除草剂筛选标记Bar基因的植物表达载体pBA002-GmPH D2.重组质粒经PCR检测、双酶切及测序验证,表明GmPHD2基因已被完整、正确的插入到pBA002载体中,之后通过冻融法将重组质粒pBA002-GmPHD2成功导人农杆菌EHA105,利用此农杆菌不仅可以介导转化大豆,而且可以转化非同源的其他作物,为进一步开展植物抗逆性的基因工程研究提供了新基因资源.
利用高保真PCR酶從剋隆載體pMD 18T-GmPHD2中擴增齣大豆PHD類轉錄因子GmPHD2,併于基因上下遊分彆引入XbaI和XhoI酶切位點；然後通過TA剋隆、載體雙酶切、連接、轉化等技術手段,將其連入植物錶達載體pBA002,構建瞭含GmPHD2和抗除草劑篩選標記Bar基因的植物錶達載體pBA002-GmPH D2.重組質粒經PCR檢測、雙酶切及測序驗證,錶明GmPHD2基因已被完整、正確的插入到pBA002載體中,之後通過凍融法將重組質粒pBA002-GmPHD2成功導人農桿菌EHA105,利用此農桿菌不僅可以介導轉化大豆,而且可以轉化非同源的其他作物,為進一步開展植物抗逆性的基因工程研究提供瞭新基因資源.
이용고보진PCR매종극륭재체pMD 18T-GmPHD2중확증출대두PHD류전록인자GmPHD2,병우기인상하유분별인입XbaI화XhoI매절위점；연후통과TA극륭、재체쌍매절、련접、전화등기술수단,장기련입식물표체재체pBA002,구건료함GmPHD2화항제초제사선표기Bar기인적식물표체재체pBA002-GmPH D2.중조질립경PCR검측、쌍매절급측서험증,표명GmPHD2기인이피완정、정학적삽입도pBA002재체중,지후통과동융법장중조질립pBA002-GmPHD2성공도인농간균EHA105,이용차농간균불부가이개도전화대두,이차가이전화비동원적기타작물,위진일보개전식물항역성적기인공정연구제공료신기인자원.
