VEGFA基因重组真核表达载体的构建与表达
VEGFA기인중조진핵표체재체적구건여표체
Construction and expression of recombinant eukaryotic expression vector of VEGFA gene
  • 万方数据
    安徽医药 안휘의약
    ANHUI MEDICAL AND PHARMACEUTICAL JOURNAL
    2013年 1期 45-47 ,共3页

    吴勇%刘学刚%郭嘉诚%李慧敏%丁周志%王亚明%宋伟%徐家丽%赵武

    오용%류학강%곽가성%리혜민%정주지%왕아명%송위%서가려%조무

    血管内皮生长因子A%基因%遗传载体 血管內皮生長因子A%基因%遺傳載體
    혈관내피생장인자A%기인%유전재체
    目的 构建VEGFA基因重组真核表达载体pEGFP-VEGFA,并检测其在人胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达.方法 以人脐血单核细胞的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增VEGFA基因,并将其定向插入真核表达载体pEGFP-Nl中,构建重组真核表达载体pEGFP-VEGFA.经限制性核酸内切酶BglII和SalI酶切和DNA测序鉴定后,用脂质体法将pEGFP-VEGFA转染HEK293T细胞,转染后24 h和48 h采用荧光显微镜观察pEGFP-VEGFA的表达.结果 pEGFP-VEGFA被双酶切为4 697 bp和1 251 bp两条条带,测序结果证实VEGFA序列与GenBank公布的VEGFA mRNA序列完全一致.在经转染的HEK293T细胞内观察到较强的绿色荧光,表明pEGFP-VEGFA成功转染HEK293T细胞,并在其中得到了表达.结论 成功构建重组真核表达载体pEGFP-VEGFA,为进一步研究VEGFA基因的生物学功能奠定了基础.
    목적 구건VEGFA기인중조진핵표체재체pEGFP-VEGFA,병검측기재인배태신세포(HEK293T)중적표체.방법 이인제혈단핵세포적RNA위모판,채용RT-PCR기술확증VEGFA기인,병장기정향삽입진핵표체재체pEGFP-Nl중,구건중조진핵표체재체pEGFP-VEGFA.경한제성핵산내절매BglII화SalI매절화DNA측서감정후,용지질체법장pEGFP-VEGFA전염HEK293T세포,전염후24 h화48 h채용형광현미경관찰pEGFP-VEGFA적표체.결과 pEGFP-VEGFA피쌍매절위4 697 bp화1 251 bp량조조대,측서결과증실VEGFA서렬여GenBank공포적VEGFA mRNA서렬완전일치.재경전염적HEK293T세포내관찰도교강적록색형광,표명pEGFP-VEGFA성공전염HEK293T세포,병재기중득도료표체.결론 성공구건중조진핵표체재체pEGFP-VEGFA,위진일보연구VEGFA기인적생물학공능전정료기출.
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