CAJ | 학술논문

MNSFβ (Monoclonal nonspecific suppressor factor β)是一种天然免疫抑制因子,参与机体免疫反应、应激反应、细胞分裂、细胞凋亡和核转运等生物过程,但其功能在猪中鲜有报道.文章通过电子克隆得到猪MNSFβ的全长序列,利用RT-PCR首次从猪脾脏中克隆了包含完整开放阅读框的MNSFβ cDNA(GenBank登录号:KF77642500)片段,测序正确后分析猪MNSFβ的核酸序列和蛋白质序列.将猪MNSFβ基因编码区序列插入表达载体pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-MNSFβ;用脂质体将重组质粒转染到猪脐静脉内皮细胞(SUVEC)中,利用荧光检测、Western blot和激光共聚焦分析SUVEC中猪MNSFβ的表达;并用实时荧光定量PCR对猪MNSFβ在不同组织的表达丰度进行分析.结果表明:猪MNSFβ基因全长402 bp,编码133个氨基酸,含一个外显子.生物信息学分析表明,猪MNSFβ为无信号肽的稳定蛋白,由泛素样结构域与核糖体蛋白S30组成.对猪MNSFβ与已发现的18个物种的MNSFβ氨基酸序列进行相似性分析和进化树分析,显示其蛋白相似度均在91％以上,且进化距离都小于0.05,说明MNSFβ在各物种间高度保守.荧光检测和Western blot结果显示,猪MNSFβ在SUVEC中成功表达,激光共聚焦显示其在细胞质与细胞核内均有分布.组织表达谱分析表明,猪MNSFβ在各免疫相关组织广泛表达,但在肺脏中未检测到表达,说明其在机体免疫反应中发挥重要作用.
MNSFβ (Monoclonal nonspecific suppressor factor β)시일충천연면역억제인자,삼여궤체면역반응、응격반응、세포분렬、세포조망화핵전운등생물과정,단기공능재저중선유보도.문장통과전자극륭득도저MNSFβ적전장서렬,이용RT-PCR수차종저비장중극륭료포함완정개방열독광적MNSFβ cDNA(GenBank등록호:KF77642500)편단,측서정학후분석저MNSFβ적핵산서렬화단백질서렬.장저MNSFβ기인편마구서렬삽입표체재체pEGFP-C1,구건진핵표체재체pEGFP-MNSFβ;용지질체장중조질립전염도저제정맥내피세포(SUVEC)중,이용형광검측、Western blot화격광공취초분석SUVEC중저MNSFβ적표체;병용실시형광정량PCR대저MNSFβ재불동조직적표체봉도진행분석.결과표명:저MNSFβ기인전장402 bp,편마133개안기산,함일개외현자.생물신식학분석표명,저MNSFβ위무신호태적은정단백,유범소양결구역여핵당체단백S30조성.대저MNSFβ여이발현적18개물충적MNSFβ안기산서렬진행상사성분석화진화수분석,현시기단백상사도균재91％이상,차진화거리도소우0.05,설명MNSFβ재각물충간고도보수.형광검측화Western blot결과현시,저MNSFβ재SUVEC중성공표체,격광공취초현시기재세포질여세포핵내균유분포.조직표체보분석표명,저MNSFβ재각면역상관조직엄범표체,단재폐장중미검측도표체,설명기재궤체면역반응중발휘중요작용.