中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2013年
23期
5906-5908
,共3页
李松林%朱妍妍%李霏%尹元琴
李鬆林%硃妍妍%李霏%尹元琴
리송림%주연연%리비%윤원금
人白细胞介素32γ%腺病毒%基因治疗
人白細胞介素32γ%腺病毒%基因治療
인백세포개소32γ%선병독%기인치료
目的 构建人白细胞介素32γ(IL-32γ)基因重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 从表达质粒pDONR223中扩增目的片段IL-32γ,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV获得pShuttle-(△GFP)-IL-32γ,经I-CeuI+ I-SceI双酶切处理后转移至腺病毒载体pAdxsi,得到Ad-IL-32γ进行PCR鉴定及滴度测定.将Ad-IL-32γ转染至人胚肾细胞HEK293中,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)确定Ad-IL-32γ的转染效率,并通过Western印迹检测目的基因IL-32γ的表达.结果 目的片段IL-32γ转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle-(AGFP)-IL-32γ正确.酶切穿梭载体将目的基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-IL-32γ病毒载体,酶切鉴定证实构建成功.Ad-IL-32γ病毒滴度为2×1010pfu/ml.转染HEK293细胞通过观察GFP判断转染效率,并通过Western印迹证实其在HEK293中的表达.结论 成功构建IL-32γ重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达IL-32γ蛋白,为进一步基于Ad-IL-32γ的基因治疗研究奠定基础.
目的 構建人白細胞介素32γ(IL-32γ)基因重組腺病毒載體,併檢測其在HEK293細胞中的錶達.方法 從錶達質粒pDONR223中擴增目的片段IL-32γ,定嚮剋隆至穿梭載體pShuttle-GFP-CMV穫得pShuttle-(△GFP)-IL-32γ,經I-CeuI+ I-SceI雙酶切處理後轉移至腺病毒載體pAdxsi,得到Ad-IL-32γ進行PCR鑒定及滴度測定.將Ad-IL-32γ轉染至人胚腎細胞HEK293中,通過觀察綠色熒光蛋白(GFP)確定Ad-IL-32γ的轉染效率,併通過Western印跡檢測目的基因IL-32γ的錶達.結果 目的片段IL-32γ轉入穿梭載體後,酶切鑒定pShuttle-(AGFP)-IL-32γ正確.酶切穿梭載體將目的基因片段剋隆至腺病毒載體pAdxsi得到Ad-IL-32γ病毒載體,酶切鑒定證實構建成功.Ad-IL-32γ病毒滴度為2×1010pfu/ml.轉染HEK293細胞通過觀察GFP判斷轉染效率,併通過Western印跡證實其在HEK293中的錶達.結論 成功構建IL-32γ重組腺病毒載體併證實其能在體外有效錶達IL-32γ蛋白,為進一步基于Ad-IL-32γ的基因治療研究奠定基礎.
목적 구건인백세포개소32γ(IL-32γ)기인중조선병독재체,병검측기재HEK293세포중적표체.방법 종표체질립pDONR223중확증목적편단IL-32γ,정향극륭지천사재체pShuttle-GFP-CMV획득pShuttle-(△GFP)-IL-32γ,경I-CeuI+ I-SceI쌍매절처리후전이지선병독재체pAdxsi,득도Ad-IL-32γ진행PCR감정급적도측정.장Ad-IL-32γ전염지인배신세포HEK293중,통과관찰록색형광단백(GFP)학정Ad-IL-32γ적전염효솔,병통과Western인적검측목적기인IL-32γ적표체.결과 목적편단IL-32γ전입천사재체후,매절감정pShuttle-(AGFP)-IL-32γ정학.매절천사재체장목적기인편단극륭지선병독재체pAdxsi득도Ad-IL-32γ병독재체,매절감정증실구건성공.Ad-IL-32γ병독적도위2×1010pfu/ml.전염HEK293세포통과관찰GFP판단전염효솔,병통과Western인적증실기재HEK293중적표체.결론 성공구건IL-32γ중조선병독재체병증실기능재체외유효표체IL-32γ단백,위진일보기우Ad-IL-32γ적기인치료연구전정기출.
