广东化工
廣東化工
엄동화공
GUANGDONG CHEMICAL INDUSTRY
2013年
24期
7-9,6
,共4页
刘嘉%黄芳%施腾鑫%贺淹才
劉嘉%黃芳%施騰鑫%賀淹纔
류가%황방%시등흠%하엄재
重组基因工程菌%几丁质酶C%可溶性表达
重組基因工程菌%幾丁質酶C%可溶性錶達
중조기인공정균%궤정질매C%가용성표체
在不同培养温度条件下对产几丁质酶C的基因工程菌BL21(DE3)进行诱导,使其表达可溶性蛋白.随后在较佳培养温度诱导条件的基础上向培养基中添加不同浓度的甘油,甘氨酸,山梨醇/甜菜碱等成分来更进一步的提高几丁质酶C的可溶性表达.其结果是在25℃诱导条件下,以添加2g/L葡萄糖的LB培养基作为基础培养基进行培养,在基础培养基中添加3g/L甘油的总酶活最高,达到了18.17 U/mL,较之仅含2g/L葡萄糖的LB培养基在37℃及25℃诱导培养条件下酶活力分别提高了41.6％和20.3％;添加0.3％甘氨酸约90％的可溶性几丁质酶表达到了胞外,胞外酶活达到14.68 U/mL;添加0.5 M山梨醇/2.5 mM甜菜碱工程菌胞内酶活达到最高,为8.43 U/mL.结果表明适当降低工程菌诱导表达时的培养温度提高了几丁质酶C的可溶性表达,在较佳温诱导表达的基础上向培养基中添加不同浓度的甘油,甘氨酸,山梨醇/甜菜碱更进一步的提高了几丁质酶C的可溶性表达.
在不同培養溫度條件下對產幾丁質酶C的基因工程菌BL21(DE3)進行誘導,使其錶達可溶性蛋白.隨後在較佳培養溫度誘導條件的基礎上嚮培養基中添加不同濃度的甘油,甘氨痠,山梨醇/甜菜堿等成分來更進一步的提高幾丁質酶C的可溶性錶達.其結果是在25℃誘導條件下,以添加2g/L葡萄糖的LB培養基作為基礎培養基進行培養,在基礎培養基中添加3g/L甘油的總酶活最高,達到瞭18.17 U/mL,較之僅含2g/L葡萄糖的LB培養基在37℃及25℃誘導培養條件下酶活力分彆提高瞭41.6％和20.3％;添加0.3％甘氨痠約90％的可溶性幾丁質酶錶達到瞭胞外,胞外酶活達到14.68 U/mL;添加0.5 M山梨醇/2.5 mM甜菜堿工程菌胞內酶活達到最高,為8.43 U/mL.結果錶明適噹降低工程菌誘導錶達時的培養溫度提高瞭幾丁質酶C的可溶性錶達,在較佳溫誘導錶達的基礎上嚮培養基中添加不同濃度的甘油,甘氨痠,山梨醇/甜菜堿更進一步的提高瞭幾丁質酶C的可溶性錶達.
재불동배양온도조건하대산궤정질매C적기인공정균BL21(DE3)진행유도,사기표체가용성단백.수후재교가배양온도유도조건적기출상향배양기중첨가불동농도적감유,감안산,산리순/첨채감등성분래경진일보적제고궤정질매C적가용성표체.기결과시재25℃유도조건하,이첨가2g/L포도당적LB배양기작위기출배양기진행배양,재기출배양기중첨가3g/L감유적총매활최고,체도료18.17 U/mL,교지부함2g/L포도당적LB배양기재37℃급25℃유도배양조건하매활력분별제고료41.6％화20.3％;첨가0.3％감안산약90％적가용성궤정질매표체도료포외,포외매활체도14.68 U/mL;첨가0.5 M산리순/2.5 mM첨채감공정균포내매활체도최고,위8.43 U/mL.결과표명괄당강저공정균유도표체시적배양온도제고료궤정질매C적가용성표체,재교가온유도표체적기출상향배양기중첨가불동농도적감유,감안산,산리순/첨채감경진일보적제고료궤정질매C적가용성표체.
