中国医药导报
中國醫藥導報
중국의약도보
CHINA MEDICAL HERALD
2012年
35期
11-13
,共3页
丁治国%何蓓%陈晓珩%汪唐顺%高翔%李乃卿
丁治國%何蓓%陳曉珩%汪唐順%高翔%李迺卿
정치국%하배%진효형%왕당순%고상%리내경
VEGF基因%慢病毒载体%RNA干扰%MHCC97L细胞
VEGF基因%慢病毒載體%RNA榦擾%MHCC97L細胞
VEGF기인%만병독재체%RNA간우%MHCC97L세포
目的 构建VEGF基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中表达.方法 根据人VEGF基因序列,设计并合成包含靶序列的互补DNA链,连接线性化的plenti6.3-MIR载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证.在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒,测定其滴度.慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用Real-time PCR检测RNAi组(MHCC97-200)、阴性对照组(MHCC97-NEGA)和空白对照组(MHCC97-空白)中VEGF的表达情况,确定其干扰VEGF表达的有效性.结果 测序证实慢VEGF基因RNAi病毒载体质粒构建成功.慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度为3.23×109 TU/mL.慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L 48 h后,VEGF基因在mRNA水平抑制了72.2%.结论 VEGF基因RNAi慢病毒载体构建成功,并实现在人肝癌细胞MHCC97L中的表达.
目的 構建VEGF基因RNA榦擾(RNAi)慢病毒載體併實現其在人肝癌細胞MHCC97L中錶達.方法 根據人VEGF基因序列,設計併閤成包含靶序列的互補DNA鏈,連接線性化的plenti6.3-MIR載體,構建miRNA慢病毒載體質粒,併轉化至感受態細胞DH5α,進行測序驗證.在脂質體介導下轉染293T細胞,包裝生產慢病毒,測定其滴度.慢病毒載體轉染人肝癌細胞MHCC97L,用Real-time PCR檢測RNAi組(MHCC97-200)、陰性對照組(MHCC97-NEGA)和空白對照組(MHCC97-空白)中VEGF的錶達情況,確定其榦擾VEGF錶達的有效性.結果 測序證實慢VEGF基因RNAi病毒載體質粒構建成功.慢病毒載體經293T細胞包裝成功,測定病毒的滴度為3.23×109 TU/mL.慢病毒載體轉染人肝癌細胞MHCC97L 48 h後,VEGF基因在mRNA水平抑製瞭72.2%.結論 VEGF基因RNAi慢病毒載體構建成功,併實現在人肝癌細胞MHCC97L中的錶達.
목적 구건VEGF기인RNA간우(RNAi)만병독재체병실현기재인간암세포MHCC97L중표체.방법 근거인VEGF기인서렬,설계병합성포함파서렬적호보DNA련,련접선성화적plenti6.3-MIR재체,구건miRNA만병독재체질립,병전화지감수태세포DH5α,진행측서험증.재지질체개도하전염293T세포,포장생산만병독,측정기적도.만병독재체전염인간암세포MHCC97L,용Real-time PCR검측RNAi조(MHCC97-200)、음성대조조(MHCC97-NEGA)화공백대조조(MHCC97-공백)중VEGF적표체정황,학정기간우VEGF표체적유효성.결과 측서증실만VEGF기인RNAi병독재체질립구건성공.만병독재체경293T세포포장성공,측정병독적적도위3.23×109 TU/mL.만병독재체전염인간암세포MHCC97L 48 h후,VEGF기인재mRNA수평억제료72.2%.결론 VEGF기인RNAi만병독재체구건성공,병실현재인간암세포MHCC97L중적표체.
