重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2013年
4期
407-409
,共3页
胃肿瘤%水通道蛋白质5%转染
胃腫瘤%水通道蛋白質5%轉染
위종류%수통도단백질5%전염
目的 构建人pcDNA3.1-AQP5/myc-His真核表达质粒,观察水通道蛋白5(AQP5)基因在胃癌AGS细胞中的稳定表达.方法采用基因重组技术将人AQP5 cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1/myc-His,构建人pcDNA3.1-AQP5/myc-His真核表达质粒.脂质体介导空载体pcDNA3.1/myc-His和表达质粒pcDNA3.1-AQP5/myc-His分别转染人胃癌AGS细胞株,G418筛选,挑取阳性克隆,扩大培养,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)分别检测AQP5 mRNA和蛋白表达.结果 双酶切和基因测序结果均证实人pcDNA3.1-AQP5/myc-His真核表达质粒构建成功.AQP5转染组与空白对照组、空载体组比较,AQP5 mRNA表达显著增加(P<0.05),AQP5蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 成功构建人AQP5真核表达质粒并获得稳定表达AQP5基因的胃癌AGS细胞系,为进一步研究AQP5蛋白对胃癌恶性表型的影响奠定实验基础.
目的 構建人pcDNA3.1-AQP5/myc-His真覈錶達質粒,觀察水通道蛋白5(AQP5)基因在胃癌AGS細胞中的穩定錶達.方法採用基因重組技術將人AQP5 cDNA插入真覈錶達載體pcDNA3.1/myc-His,構建人pcDNA3.1-AQP5/myc-His真覈錶達質粒.脂質體介導空載體pcDNA3.1/myc-His和錶達質粒pcDNA3.1-AQP5/myc-His分彆轉染人胃癌AGS細胞株,G418篩選,挑取暘性剋隆,擴大培養,逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)和蛋白質印跡法(Western Blot)分彆檢測AQP5 mRNA和蛋白錶達.結果 雙酶切和基因測序結果均證實人pcDNA3.1-AQP5/myc-His真覈錶達質粒構建成功.AQP5轉染組與空白對照組、空載體組比較,AQP5 mRNA錶達顯著增加(P<0.05),AQP5蛋白錶達顯著上調(P<0.05).結論 成功構建人AQP5真覈錶達質粒併穫得穩定錶達AQP5基因的胃癌AGS細胞繫,為進一步研究AQP5蛋白對胃癌噁性錶型的影響奠定實驗基礎.
목적 구건인pcDNA3.1-AQP5/myc-His진핵표체질립,관찰수통도단백5(AQP5)기인재위암AGS세포중적은정표체.방법채용기인중조기술장인AQP5 cDNA삽입진핵표체재체pcDNA3.1/myc-His,구건인pcDNA3.1-AQP5/myc-His진핵표체질립.지질체개도공재체pcDNA3.1/myc-His화표체질립pcDNA3.1-AQP5/myc-His분별전염인위암AGS세포주,G418사선,도취양성극륭,확대배양,역전록-취합매련반응(RT-PCR)화단백질인적법(Western Blot)분별검측AQP5 mRNA화단백표체.결과 쌍매절화기인측서결과균증실인pcDNA3.1-AQP5/myc-His진핵표체질립구건성공.AQP5전염조여공백대조조、공재체조비교,AQP5 mRNA표체현저증가(P<0.05),AQP5단백표체현저상조(P<0.05).결론 성공구건인AQP5진핵표체질립병획득은정표체AQP5기인적위암AGS세포계,위진일보연구AQP5단백대위암악성표형적영향전정실험기출.
