CAJ | 학술논문

目的:探索异丹叶大黄素(ISO)下调肿瘤细胞中细胞周期蛋白D1表达的分子机制.方法:以ISO作用于人源性膀胱癌UMUC3、RT12和RT4细胞后用Western blotting法检测细胞周期蛋白D1表达水平;以RTPCR法检测细胞周期蛋白D1 mRNA的表达水平.稳定转染细胞周期蛋白D1启动子萤光素酶报告基因至UMUC3细胞并筛选后,检测ISO预处理后萤光素酶活性.ISO预处理UMUC3细胞后,提取核蛋白检测核转录因子表达水平的变化.分别稳定转染GFP和GFP-细胞周期蛋白D1表达构建载体,筛选克隆;ISO预处理后,Western blotting 法检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达水平,贴壁依赖性细胞生长实验法检测细胞生长能力的变化,流式细胞术检测细胞周期的变化.分别稳定转染人源性细胞周期蛋白D1野生型和-163位点突变型萤光素酶报告基因质粒载体至UMUC3细胞并筛选,ISO预处理后检测细胞的萤光素酶活性.最后利用染色质免疫沉淀的方法,以抗Sp1抗体检测ISO对Sp1与细胞周期蛋白D1启动子结合力的影响.结果:ISO可从mRNA和蛋白水平显著抑制肿瘤细胞的细胞周期蛋白D1水平,并且是从内源性转录水平来抑制细胞周期蛋白D1的转录.ISO可抑制、下调核转录因子Sp1的表达,并抑制Sp1与细胞周期蛋白D1启动子区域的结合力,该结合位点主要位于启动子-92到+27bp的5’-非翻译区.结论:ISO可通过下调Sp1核转录因子表达及其与细胞周期蛋白D1启动子的结合,从内源性转录水平来抑制细胞周期蛋白D1的表达,从而诱导G0/G1细胞周期阻滞并抑制肿瘤细胞增殖.我们的研究将为临床中药单体ISO综合治疗肿瘤提供新的策略.
목적:탐색이단협대황소(ISO)하조종류세포중세포주기단백D1표체적분자궤제.방법:이ISO작용우인원성방광암UMUC3、RT12화RT4세포후용Western blotting법검측세포주기단백D1표체수평;이RTPCR법검측세포주기단백D1 mRNA적표체수평.은정전염세포주기단백D1계동자형광소매보고기인지UMUC3세포병사선후,검측ISO예처리후형광소매활성.ISO예처리UMUC3세포후,제취핵단백검측핵전록인자표체수평적변화.분별은정전염GFP화GFP-세포주기단백D1표체구건재체,사선극륭;ISO예처리후,Western blotting 법검측세포주기단백D1적단백표체수평,첩벽의뢰성세포생장실험법검측세포생장능력적변화,류식세포술검측세포주기적변화.분별은정전염인원성세포주기단백D1야생형화-163위점돌변형형광소매보고기인질립재체지UMUC3세포병사선,ISO예처리후검측세포적형광소매활성.최후이용염색질면역침정적방법,이항Sp1항체검측ISO대Sp1여세포주기단백D1계동자결합력적영향.결과:ISO가종mRNA화단백수평현저억제종류세포적세포주기단백D1수평,병차시종내원성전록수평래억제세포주기단백D1적전록.ISO가억제、하조핵전록인자Sp1적표체,병억제Sp1여세포주기단백D1계동자구역적결합력,해결합위점주요위우계동자-92도+27bp적5’-비번역구.결론:ISO가통과하조Sp1핵전록인자표체급기여세포주기단백D1계동자적결합,종내원성전록수평래억제세포주기단백D1적표체,종이유도G0/G1세포주기조체병억제종류세포증식.아문적연구장위림상중약단체ISO종합치료종류제공신적책략.