CAJ | 학술논문

目的探讨周期性依赖性蛋白激酶5(Cdk5)的活性抑制肽(CIP)在糖尿病中的治疗作用及其机制.方法体外培养Min6小鼠胰岛细胞(以下简称胰岛细胞),应用基因克隆CIP质粒,转入腺病毒,转染细胞.根据是否导入CIP基因分为空载体组(EV组)和CIP转染组.应用不同浓度的葡萄糖(5 mmoL/l和25 mmol/L)刺激胰岛细胞,分为EV+5 mM组、EV+25 mM组、CIP+5 mM组、CIP+25 mM组.用免疫印迹和免疫荧光检测基因的表达和细胞凋亡情况,同位素标记测定酶的活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定胰岛素的分泌水平.体内试验,正常小鼠、糖尿病小鼠组、CIP+糖尿病小鼠组,喂养14周时腹腔内注射EV和CIP病毒,检测各组小鼠体重、血糖、糖化血红蛋白指标及各种分子病理实验.结果在同样浓度的高糖刺激Min6细胞下,Cdk5的活性在CIP组较EV组明显受到抑制(P＜0.01);高糖(HG)+EV组较低糖(LG)+EV组细胞凋亡相关蛋白表达增加(P＜0.01),而转染了CIP基因细胞的凋亡相关蛋白较HG+EV细胞明显下降(P＜0.01);胰岛素基因的表达和分泌在EV组高糖刺激6 h的细胞较2 h的细胞明显降低,而转染CIP的细胞较EV细胞胰岛素基因的表达和分泌均明显升高(P＜0.01);体内试验结果显示,体重、血糖和糖化血红蛋白指标,在 db/db组与db/db+CIP组差异无统计学意义(P＞0.05); 细胞凋亡蛋白在db/db+CIP组较db/db组明显降低;胰岛素基因的表达db/db+CIP组较db/db组明显增高.结论 CIP可以降低Min6细胞由于高糖导致的Cdk5的过度活性,抑制胰岛细胞的凋亡,恢复胰岛素的分泌,这可能是CIP在糖尿病中起到保护性作用的机制之一.
목적 탐토주기성의뢰성단백격매5(Cdk5)적활성억제태(CIP)재당뇨병중적치료작용급기궤제.방법 체외배양Min6소서이도세포(이하간칭이도세포),응용기인극륭CIP질립,전입선병독,전염세포.근거시부도입CIP기인분위공재체조(EV조)화CIP전염조.응용불동농도적포도당(5 mmoL/l화25 mmol/L)자격이도세포,분위EV+5 mM조、EV+25 mM조、CIP+5 mM조、CIP+25 mM조.용면역인적화면역형광검측기인적표체화세포조망정황,동위소표기측정매적활성,매련면역흡부시험(ELISA)측정이도소적분비수평.체내시험,정상소서、당뇨병소서조、CIP+당뇨병소서조,위양14주시복강내주사EV화CIP병독,검측각조소서체중、혈당、당화혈홍단백지표급각충분자병리실험.결과 재동양농도적고당자격Min6세포하,Cdk5적활성재CIP조교EV조명현수도억제(P＜0.01);고당(HG)+EV조교저당(LG)+EV조세포조망상관단백표체증가(P＜0.01),이전염료CIP기인세포적조망상관단백교HG+EV세포명현하강(P＜0.01);이도소기인적표체화분비재EV조고당자격6 h적세포교2 h적세포명현강저,이전염CIP적세포교EV세포이도소기인적표체화분비균명현승고(P＜0.01);체내시험결과현시,체중、혈당화당화혈홍단백지표,재 db/db조여db/db+CIP조차이무통계학의의(P＞0.05); 세포조망단백재db/db+CIP조교db/db조명현강저;이도소기인적표체db/db+CIP조교db/db조명현증고.결론 CIP가이강저Min6세포유우고당도치적Cdk5적과도활성,억제이도세포적조망,회복이도소적분비,저가능시CIP재당뇨병중기도보호성작용적궤제지일.