解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2012年
6期
762-766
,共5页
周世权%廖智%杨林%周吉航%刘晓光
週世權%廖智%楊林%週吉航%劉曉光
주세권%료지%양림%주길항%류효광
外周血%免疫球蛋白%重链%可变区%反转录-聚合酶链反应%序列分析%兔
外週血%免疫毬蛋白%重鏈%可變區%反轉錄-聚閤酶鏈反應%序列分析%兔
외주혈%면역구단백%중련%가변구%반전록-취합매련반응%서렬분석%토
目的 从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因.方法 先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,然后设计嵌套引物,以兔外周血总RNA为模板,进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,产物经胶回收后克隆到T载体,随机挑选白色克隆测序,最后将序列用Bioedit软件的Local Blast功能比对出Cγ的基因型,同时提交到IMGT/V-QUEST分析出所属的VH、D和JH胚系基因.结果 获得25个克隆的插入子序列,每个克隆均为兔IgG重链可变区的编码基因,且包含了完整的VH、D、JH胚系基因片段,以及Cγ基因第1个外显子(CH1)序列的5’端部分,但没有任何2个克隆的序列完全相同.37个IGHV功能基因出现了2个;11个IGHD功能基因出现了8个;11个IGHJ功能基因出现了4个.VH-D-JH组合方式共出现18种,即使VH-D-JH组合方式相同,序列仍具有明显的差异.结论 从兔外周血总RNA中直接扩增出了IgG重链可变区,自行设计的引物显示出了高度的特异性和良好的兼并性.
目的 從兔外週血總RNA中直接擴增齣IgG重鏈可變區基因.方法 先從IMGT/GENE-DB數據庫中穫取編碼大耳白兔免疫毬蛋白(Ig)重鏈可變區(VH)的3箇胚繫基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及編碼γ重鏈恆定區(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,然後設計嵌套引物,以兔外週血總RNA為模闆,進行RT-PCR和Nested-PCR擴增,產物經膠迴收後剋隆到T載體,隨機挑選白色剋隆測序,最後將序列用Bioedit軟件的Local Blast功能比對齣Cγ的基因型,同時提交到IMGT/V-QUEST分析齣所屬的VH、D和JH胚繫基因.結果 穫得25箇剋隆的插入子序列,每箇剋隆均為兔IgG重鏈可變區的編碼基因,且包含瞭完整的VH、D、JH胚繫基因片段,以及Cγ基因第1箇外顯子(CH1)序列的5’耑部分,但沒有任何2箇剋隆的序列完全相同.37箇IGHV功能基因齣現瞭2箇;11箇IGHD功能基因齣現瞭8箇;11箇IGHJ功能基因齣現瞭4箇.VH-D-JH組閤方式共齣現18種,即使VH-D-JH組閤方式相同,序列仍具有明顯的差異.結論 從兔外週血總RNA中直接擴增齣瞭IgG重鏈可變區,自行設計的引物顯示齣瞭高度的特異性和良好的兼併性.
목적 종토외주혈총RNA중직접확증출IgG중련가변구기인.방법 선종IMGT/GENE-DB수거고중획취편마대이백토면역구단백(Ig)중련가변구(VH)적3개배계기인편단VH(IGHV)、D(IGHD)화JH(IGHJ),이급편마γ중련항정구(CH)기인Cγ(IGHG)적cDNA서렬,연후설계감투인물,이토외주혈총RNA위모판,진행RT-PCR화Nested-PCR확증,산물경효회수후극륭도T재체,수궤도선백색극륭측서,최후장서렬용Bioedit연건적Local Blast공능비대출Cγ적기인형,동시제교도IMGT/V-QUEST분석출소속적VH、D화JH배계기인.결과 획득25개극륭적삽입자서렬,매개극륭균위토IgG중련가변구적편마기인,차포함료완정적VH、D、JH배계기인편단,이급Cγ기인제1개외현자(CH1)서렬적5’단부분,단몰유임하2개극륭적서렬완전상동.37개IGHV공능기인출현료2개;11개IGHD공능기인출현료8개;11개IGHJ공능기인출현료4개.VH-D-JH조합방식공출현18충,즉사VH-D-JH조합방식상동,서렬잉구유명현적차이.결론 종토외주혈총RNA중직접확증출료IgG중련가변구,자행설계적인물현시출료고도적특이성화량호적겸병성.
