解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2012年
6期
744-750
,共7页
王文锋%马建敏%杨洪%刘方%陈香丽%宁黔冀
王文鋒%馬建敏%楊洪%劉方%陳香麗%寧黔冀
왕문봉%마건민%양홍%류방%진향려%저검기
酚氧化酶原%时空表达%快速扩增cDNA末端技术%实时荧光定量聚合酶链反应%日本沼虾
酚氧化酶原%時空錶達%快速擴增cDNA末耑技術%實時熒光定量聚閤酶鏈反應%日本沼蝦
분양화매원%시공표체%쾌속확증cDNA말단기술%실시형광정량취합매련반응%일본소하
目的 克隆日本沼虾酚氧化酶原(proPO)基因,进行生物信息学及时空表达分析.方法 利用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(RACE)技术从血细胞中克隆proPO基因cDNA全长序列,用生物软件对其序列进行生物信息学分析;proPO基因时空表达分析采用RT-PCR和Real-time PCR方法;腹部肌肉注射嗜水气单胞菌(5.0×109/L)诱导酚氧化酶(PO),20 μl/只,注射后3、6、12、24h取其血淋巴,分别测定血细胞proPO mRNA水平及血清酚氧化酶(PO)活力.结果 日本沼虾proPO基因cDNA全长2428bp,包含71 bp的5'UTR、344 bp的3'UTR和2013bp的开放阅读框(ORF).ORF编码671个氨基酸,预测蛋白分子量为76.5kD,理论等电点(pI)约为7.31;含有2个保守的铜离子结合位点和6个组氨酸残基、1个蛋白酶水解位点和硫酯样的基序(GCGWPRHM);含有3个血蓝蛋白结构域;与罗氏沼虾proPO的相似性最高,为93％,与其他甲壳动物proPO相似性为50％～ 53％.该基因表达具有组织特异性,血细胞最高,肝胰腺有较弱表达,肌肉、鳃、肠、大颚器官和卵巢不表达;血细胞proPO基因的表达量在蜕皮前期(D0/1)最高;嗜水气单胞菌刺激后6h血细胞proPO mRNA水平及血清中PO活力均显著增加.结论 与其他甲壳动物相似,日本沼虾proPO基因具有2个保守的铜离子结合位点;其表达呈组织特异性,最高出现在血细胞;在蜕皮周期的前期(D0/1)血细胞表达量最高;嗜水气单胞菌可诱导proPO基因的表达以及PO活力,提示该基因是参与机体免疫防御反应的一种重要分子.
目的 剋隆日本沼蝦酚氧化酶原(proPO)基因,進行生物信息學及時空錶達分析.方法 利用RT-PCR和快速擴增cDNA末耑(RACE)技術從血細胞中剋隆proPO基因cDNA全長序列,用生物軟件對其序列進行生物信息學分析;proPO基因時空錶達分析採用RT-PCR和Real-time PCR方法;腹部肌肉註射嗜水氣單胞菌(5.0×109/L)誘導酚氧化酶(PO),20 μl/隻,註射後3、6、12、24h取其血淋巴,分彆測定血細胞proPO mRNA水平及血清酚氧化酶(PO)活力.結果 日本沼蝦proPO基因cDNA全長2428bp,包含71 bp的5'UTR、344 bp的3'UTR和2013bp的開放閱讀框(ORF).ORF編碼671箇氨基痠,預測蛋白分子量為76.5kD,理論等電點(pI)約為7.31;含有2箇保守的銅離子結閤位點和6箇組氨痠殘基、1箇蛋白酶水解位點和硫酯樣的基序(GCGWPRHM);含有3箇血藍蛋白結構域;與囉氏沼蝦proPO的相似性最高,為93％,與其他甲殼動物proPO相似性為50％～ 53％.該基因錶達具有組織特異性,血細胞最高,肝胰腺有較弱錶達,肌肉、鰓、腸、大顎器官和卵巢不錶達;血細胞proPO基因的錶達量在蛻皮前期(D0/1)最高;嗜水氣單胞菌刺激後6h血細胞proPO mRNA水平及血清中PO活力均顯著增加.結論 與其他甲殼動物相似,日本沼蝦proPO基因具有2箇保守的銅離子結閤位點;其錶達呈組織特異性,最高齣現在血細胞;在蛻皮週期的前期(D0/1)血細胞錶達量最高;嗜水氣單胞菌可誘導proPO基因的錶達以及PO活力,提示該基因是參與機體免疫防禦反應的一種重要分子.
목적 극륭일본소하분양화매원(proPO)기인,진행생물신식학급시공표체분석.방법 이용RT-PCR화쾌속확증cDNA말단(RACE)기술종혈세포중극륭proPO기인cDNA전장서렬,용생물연건대기서렬진행생물신식학분석;proPO기인시공표체분석채용RT-PCR화Real-time PCR방법;복부기육주사기수기단포균(5.0×109/L)유도분양화매(PO),20 μl/지,주사후3、6、12、24h취기혈림파,분별측정혈세포proPO mRNA수평급혈청분양화매(PO)활력.결과 일본소하proPO기인cDNA전장2428bp,포함71 bp적5'UTR、344 bp적3'UTR화2013bp적개방열독광(ORF).ORF편마671개안기산,예측단백분자량위76.5kD,이론등전점(pI)약위7.31;함유2개보수적동리자결합위점화6개조안산잔기、1개단백매수해위점화류지양적기서(GCGWPRHM);함유3개혈람단백결구역;여라씨소하proPO적상사성최고,위93％,여기타갑각동물proPO상사성위50％～ 53％.해기인표체구유조직특이성,혈세포최고,간이선유교약표체,기육、새、장、대악기관화란소불표체;혈세포proPO기인적표체량재세피전기(D0/1)최고;기수기단포균자격후6h혈세포proPO mRNA수평급혈청중PO활력균현저증가.결론 여기타갑각동물상사,일본소하proPO기인구유2개보수적동리자결합위점;기표체정조직특이성,최고출현재혈세포;재세피주기적전기(D0/1)혈세포표체량최고;기수기단포균가유도proPO기인적표체이급PO활력,제시해기인시삼여궤체면역방어반응적일충중요분자.
