解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2012年
6期
739-743
,共5页
欧阳长杰%段线花%王德广%曲德伟
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海马%神经干细胞%增殖%分化%激光扫描共焦显微镜%大鼠
海馬%神經榦細胞%增殖%分化%激光掃描共焦顯微鏡%大鼠
해마%신경간세포%증식%분화%격광소묘공초현미경%대서
目的 采用激光扫描共焦显微镜观察体外培养胎鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖、凋亡及其分化情况.方法 体外分离培养胚胎大鼠海马NSCs,把神经干细胞球培养在共焦显微镜专用培养皿中.用Hoechst 33258染细胞核,免疫荧光细胞化学技术检测巢蛋白(Nestin)的表达以鉴定NSCs,检测神经元、星形胶质细胞的特异性标记物β-Ⅲ型微管蛋白(β-Ⅲtubulin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达以测定NSCs的分化能力.通过激光扫描共焦显微镜对神经干细胞球进行光学连续断层扫描,然后用软件进行三维重建,立体动态观察神经球.结果 通过激光扫描共焦显微镜观察到神经球Nestin阳性表达,NSCs的突起随着发育逐渐增长,并相互缠绕,经2次传代后培养7d的NSCs凋亡率为(8.60±2.20)％.在血清诱导下分化后的细胞突起从细胞球向四周呈放射状迁移,且突起相互交错成网状.经2次传代后诱导分化7d的NSCs分化为星形胶质细胞和神经元的比例分别为(68.60±7.64)％和(29.90±8.22)％ (P ＜0.01).结论 对大鼠神经干细胞球的增殖、凋亡及分化的观察激光扫描共焦显微镜发挥了独特的优势.
目的 採用激光掃描共焦顯微鏡觀察體外培養胎鼠海馬神經榦細胞(NSCs)增殖、凋亡及其分化情況.方法 體外分離培養胚胎大鼠海馬NSCs,把神經榦細胞毬培養在共焦顯微鏡專用培養皿中.用Hoechst 33258染細胞覈,免疫熒光細胞化學技術檢測巢蛋白(Nestin)的錶達以鑒定NSCs,檢測神經元、星形膠質細胞的特異性標記物β-Ⅲ型微管蛋白(β-Ⅲtubulin)和膠質纖維痠性蛋白(GFAP)的錶達以測定NSCs的分化能力.通過激光掃描共焦顯微鏡對神經榦細胞毬進行光學連續斷層掃描,然後用軟件進行三維重建,立體動態觀察神經毬.結果 通過激光掃描共焦顯微鏡觀察到神經毬Nestin暘性錶達,NSCs的突起隨著髮育逐漸增長,併相互纏繞,經2次傳代後培養7d的NSCs凋亡率為(8.60±2.20)％.在血清誘導下分化後的細胞突起從細胞毬嚮四週呈放射狀遷移,且突起相互交錯成網狀.經2次傳代後誘導分化7d的NSCs分化為星形膠質細胞和神經元的比例分彆為(68.60±7.64)％和(29.90±8.22)％ (P ＜0.01).結論 對大鼠神經榦細胞毬的增殖、凋亡及分化的觀察激光掃描共焦顯微鏡髮揮瞭獨特的優勢.
목적 채용격광소묘공초현미경관찰체외배양태서해마신경간세포(NSCs)증식、조망급기분화정황.방법 체외분리배양배태대서해마NSCs,파신경간세포구배양재공초현미경전용배양명중.용Hoechst 33258염세포핵,면역형광세포화학기술검측소단백(Nestin)적표체이감정NSCs,검측신경원、성형효질세포적특이성표기물β-Ⅲ형미관단백(β-Ⅲtubulin)화효질섬유산성단백(GFAP)적표체이측정NSCs적분화능력.통과격광소묘공초현미경대신경간세포구진행광학련속단층소묘,연후용연건진행삼유중건,입체동태관찰신경구.결과 통과격광소묘공초현미경관찰도신경구Nestin양성표체,NSCs적돌기수착발육축점증장,병상호전요,경2차전대후배양7d적NSCs조망솔위(8.60±2.20)％.재혈청유도하분화후적세포돌기종세포구향사주정방사상천이,차돌기상호교착성망상.경2차전대후유도분화7d적NSCs분화위성형효질세포화신경원적비례분별위(68.60±7.64)％화(29.90±8.22)％ (P ＜0.01).결론 대대서신경간세포구적증식、조망급분화적관찰격광소묘공초현미경발휘료독특적우세.
