浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2013年
1期
6-13
,共8页
DNA/分析%基因组%聚合酶链反应%基因扩增%水凝胶%电泳,聚丙烯酰氨凝胶
DNA/分析%基因組%聚閤酶鏈反應%基因擴增%水凝膠%電泳,聚丙烯酰氨凝膠
DNA/분석%기인조%취합매련반응%기인확증%수응효%전영,취병희선안응효
目的:通过对人基因组DNA固定化的研究,探讨特异性高的单点共价固定方法,实现对人基因组DNA的反复利用.方法:选取Mirzabekov等发明的DNA-水凝胶共聚化学法作为基因组DNA固定方法,使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,以(CH2)6-NH2氨基末端修饰的PCR产物及甲酸随机断裂修饰的pGEM-T-HLA-G质粒为模板,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其固定效率,并通过PCR法检测该固定方法的热稳定性.将该法初步应用于人类基因组DNA的固定和反复利用,对基因组DNA扩增的片段进行测序,排除突变可能.结果:使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,实现了对质粒DNA以及人基因组DNA的固定和反复使用,该方法可以经受16轮的PCR扩增(每轮36个循环).测序结果证实基因组DNA的扩增片段未发生突变.结论:甲基丙烯酰胺凝胶法固定DNA的热稳定性好,特异性高,可用于全基因组测序及SNP检测.
目的:通過對人基因組DNA固定化的研究,探討特異性高的單點共價固定方法,實現對人基因組DNA的反複利用.方法:選取Mirzabekov等髮明的DNA-水凝膠共聚化學法作為基因組DNA固定方法,使用甲基丙烯酰胺凝膠作為固相支持載體,以(CH2)6-NH2氨基末耑脩飾的PCR產物及甲痠隨機斷裂脩飾的pGEM-T-HLA-G質粒為模闆,使用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測其固定效率,併通過PCR法檢測該固定方法的熱穩定性.將該法初步應用于人類基因組DNA的固定和反複利用,對基因組DNA擴增的片段進行測序,排除突變可能.結果:使用甲基丙烯酰胺凝膠作為固相支持載體,實現瞭對質粒DNA以及人基因組DNA的固定和反複使用,該方法可以經受16輪的PCR擴增(每輪36箇循環).測序結果證實基因組DNA的擴增片段未髮生突變.結論:甲基丙烯酰胺凝膠法固定DNA的熱穩定性好,特異性高,可用于全基因組測序及SNP檢測.
목적:통과대인기인조DNA고정화적연구,탐토특이성고적단점공개고정방법,실현대인기인조DNA적반복이용.방법:선취Mirzabekov등발명적DNA-수응효공취화학법작위기인조DNA고정방법,사용갑기병희선알응효작위고상지지재체,이(CH2)6-NH2안기말단수식적PCR산물급갑산수궤단렬수식적pGEM-T-HLA-G질립위모판,사용취병희선알응효전영검측기고정효솔,병통과PCR법검측해고정방법적열은정성.장해법초보응용우인류기인조DNA적고정화반복이용,대기인조DNA확증적편단진행측서,배제돌변가능.결과:사용갑기병희선알응효작위고상지지재체,실현료대질립DNA이급인기인조DNA적고정화반복사용,해방법가이경수16륜적PCR확증(매륜36개순배).측서결과증실기인조DNA적확증편단미발생돌변.결론:갑기병희선알응효법고정DNA적열은정성호,특이성고,가용우전기인조측서급SNP검측.
