CAJ | 학술논문

背景:Claudin-1是一种多功能蛋白,除了组成紧密连接封闭细胞间隙,它在转录水平的表达失调可能作为一种分子标志反映到恶性肿瘤的侵袭转移和预后中.目的:构建重组大鼠重组Claudin-1萤光素酶报告基因质粒.方法:设计和合成包含5'非转录区的约2 000 bp的脱氧核糖核酸链,经过限制性内切酶KpnⅠ和MluⅠ酶切后插入到pGL3-Basic载体中,并用感受态E.coli DH5α和Pmd18-T-simple载体筛选阳性样品.阳性克隆通过测序和PCR证实.实验分为4组:对照组,阳性对照组(pGL3-promoter质粒转染),阴性对照组(转染pGL3-Basic质粒),实验组(转染pGL3-Claudin-1 promoter质粒).将质粒转染293T细胞检测Claudin-1启动子活性.结果与结论:重组质粒DNA测序结果采用NCBI blast比对与GenBank(gi162750811)中大鼠Claudin-1基因启动子序列完全匹配.重组萤光素酶报告基因转录活性检测与pGL3-Basic质粒相比,重组pGL3质粒转录活性明显增强 (P < 0.001).经过测序和转染结果证实有效的pGL3-Claudin-1启动子质粒构建成功.
배경:Claudin-1시일충다공능단백,제료조성긴밀련접봉폐세포간극,타재전록수평적표체실조가능작위일충분자표지반영도악성종류적침습전이화예후중.목적:구건중조대서중조Claudin-1형광소매보고기인질립.방법:설계화합성포함5'비전록구적약2 000 bp적탈양핵당핵산련,경과한제성내절매KpnⅠ화MluⅠ매절후삽입도pGL3-Basic재체중,병용감수태E.coli DH5α화Pmd18-T-simple재체사선양성양품.양성극륭통과측서화PCR증실.실험분위4조:대조조,양성대조조(pGL3-promoter질립전염),음성대조조(전염pGL3-Basic질립),실험조(전염pGL3-Claudin-1 promoter질립).장질립전염293T세포검측Claudin-1계동자활성.결과여결론:중조질립DNA측서결과채용NCBI blast비대여GenBank(gi162750811)중대서Claudin-1기인계동자서렬완전필배.중조형광소매보고기인전록활성검측여pGL3-Basic질립상비,중조pGL3질립전록활성명현증강 (P < 0.001).경과측서화전염결과증실유효적pGL3-Claudin-1계동자질립구건성공.