中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
27期
5087-5091
,共5页
袁晓峰%项鹏%李伟强%胡晓俊%彭朝权
袁曉峰%項鵬%李偉彊%鬍曉俊%彭朝權
원효봉%항붕%리위강%호효준%팽조권
平滑肌肌动蛋白α%多位点Gateway技术%慢病毒%绿色荧光蛋白%干细胞
平滑肌肌動蛋白α%多位點Gateway技術%慢病毒%綠色熒光蛋白%榦細胞
평활기기동단백α%다위점Gateway기술%만병독%록색형광단백%간세포
背景:平滑肌肌动蛋白α基因是相对局限于在血管平滑肌细胞中表达的少数几个基因之一,公认是血管平滑肌细胞表型转化的标志.目的:利用多位点Gateway技术构建慢病毒载体pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α控制绿色荧光蛋白基因的表达.方法:设计合成含有attB位点的小鼠平滑肌肌动蛋白α基因启动子引物,构建pUp-平滑肌肌动蛋白α;通过LR反应将pUp-平滑肌肌动蛋白α和pDown-绿色荧光蛋白(含att位点的绿色荧光蛋白入门克隆)连接到目的载体pDEST-puromycin,得到pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α-绿色荧光蛋白表达载体;经PCR和测序鉴定,将载体质粒瞬时转染C2C12细胞系,并且用免疫荧光染色检测基因的表达.结果与结论:成功构建pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α-绿色荧光蛋白报告基因载体,测序结果表明启动子序列正确;细胞转染实验以及免疫荧光检测证实构建的报告基因载体可以反映平滑肌肌动蛋白α基因的表达情况.
揹景:平滑肌肌動蛋白α基因是相對跼限于在血管平滑肌細胞中錶達的少數幾箇基因之一,公認是血管平滑肌細胞錶型轉化的標誌.目的:利用多位點Gateway技術構建慢病毒載體pLVpuro/平滑肌肌動蛋白α控製綠色熒光蛋白基因的錶達.方法:設計閤成含有attB位點的小鼠平滑肌肌動蛋白α基因啟動子引物,構建pUp-平滑肌肌動蛋白α;通過LR反應將pUp-平滑肌肌動蛋白α和pDown-綠色熒光蛋白(含att位點的綠色熒光蛋白入門剋隆)連接到目的載體pDEST-puromycin,得到pLVpuro/平滑肌肌動蛋白α-綠色熒光蛋白錶達載體;經PCR和測序鑒定,將載體質粒瞬時轉染C2C12細胞繫,併且用免疫熒光染色檢測基因的錶達.結果與結論:成功構建pLVpuro/平滑肌肌動蛋白α-綠色熒光蛋白報告基因載體,測序結果錶明啟動子序列正確;細胞轉染實驗以及免疫熒光檢測證實構建的報告基因載體可以反映平滑肌肌動蛋白α基因的錶達情況.
배경:평활기기동단백α기인시상대국한우재혈관평활기세포중표체적소수궤개기인지일,공인시혈관평활기세포표형전화적표지.목적:이용다위점Gateway기술구건만병독재체pLVpuro/평활기기동단백α공제록색형광단백기인적표체.방법:설계합성함유attB위점적소서평활기기동단백α기인계동자인물,구건pUp-평활기기동단백α;통과LR반응장pUp-평활기기동단백α화pDown-록색형광단백(함att위점적록색형광단백입문극륭)련접도목적재체pDEST-puromycin,득도pLVpuro/평활기기동단백α-록색형광단백표체재체;경PCR화측서감정,장재체질립순시전염C2C12세포계,병차용면역형광염색검측기인적표체.결과여결론:성공구건pLVpuro/평활기기동단백α-록색형광단백보고기인재체,측서결과표명계동자서렬정학;세포전염실험이급면역형광검측증실구건적보고기인재체가이반영평활기기동단백α기인적표체정황.
