草原与草坪
草原與草坪
초원여초평
GRASSLAND AND TURF
2012年
3期
49-52,57
,共5页
富新年%师尚礼%王赞%李俊%闫洪唯
富新年%師尚禮%王讚%李俊%閆洪唯
부신년%사상례%왕찬%리준%염홍유
百脉根%ISSR%反应体系%优化
百脈根%ISSR%反應體繫%優化
백맥근%ISSR%반응체계%우화
Lotus corniculatus%ISSR%reaction system%optimization
运用L16（45）正交设计对百脉根ISSR反应的5个因素,即DNA模板浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Mg2＋浓度、TaqDNA聚合酶浓度在4个水平上进行优化实验,通过不同反应体系扩增效果比较,最终确定在20uL体系中各反应物的最适含量为：40ng模板DNA、2μL 10×PCR Buffer、0.15mmol/LdNTPs、0.75μmol/L ISSR引物、1.5mmol/L MgCl2、1UTaqDNA聚合酶。该体系的建立为今后利用ISSR技术进行百脉根属种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。
運用L16（45）正交設計對百脈根ISSR反應的5箇因素,即DNA模闆濃度、dNTPs濃度、引物濃度、Mg2＋濃度、TaqDNA聚閤酶濃度在4箇水平上進行優化實驗,通過不同反應體繫擴增效果比較,最終確定在20uL體繫中各反應物的最適含量為：40ng模闆DNA、2μL 10×PCR Buffer、0.15mmol/LdNTPs、0.75μmol/L ISSR引物、1.5mmol/L MgCl2、1UTaqDNA聚閤酶。該體繫的建立為今後利用ISSR技術進行百脈根屬種質資源的遺傳多樣性分析奠定瞭技術基礎。
운용L16（45）정교설계대백맥근ISSR반응적5개인소,즉DNA모판농도、dNTPs농도、인물농도、Mg2＋농도、TaqDNA취합매농도재4개수평상진행우화실험,통과불동반응체계확증효과비교,최종학정재20uL체계중각반응물적최괄함량위：40ng모판DNA、2μL 10×PCR Buffer、0.15mmol/LdNTPs、0.75μmol/L ISSR인물、1.5mmol/L MgCl2、1UTaqDNA취합매。해체계적건립위금후이용ISSR기술진행백맥근속충질자원적유전다양성분석전정료기술기출。
The orthogonal design of five factors, concentrations of DNA template, dNTPs, primer, Mg2＋ and Taq DNA polymerase,in four levels was used to optimize ISSR-PCR amplification system for Lotus cornicula- tus. The results showed that the optimum concentration of seven reactants in 20 μL reaction mixture were as follows.40 ng genomic DNA,2 μL 10×PCR buffer,0.15 mmol·L^-1 dNTPs,0.75μmmol·L^-1 ISSR primer, 1.5 mmol·L^-1 MgCl2, 1 U Taq DNA polymerase. The reaction system would provide the basis for the diversity analysis of Lotus corniculatus with ISSR markers.
